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生物技术实验指南与习题集解析

题目与答案

一、选择题（每题2分，共20题）

1.在PCR实验中，以下哪一项是引物设计的关键考虑因素？（）

A.引物长度应在150-200bp

B.引物GC含量应低于40%

C.引物之间不应存在互补性

D.引物应具有特定的退火温度

答案：D

解析：引物设计时，退火温度的匹配是关键，直接影响PCR扩增效率。引物长度通常为18-25bp，GC含量一般控制在40%-60%，引物之间需避免二聚体或发夹结构。

2.下列哪种方法常用于基因测序的测序反应？（）

A.凝胶电泳分离

B.毛细管电泳分离

C.沉淀法分离

D.薄层色谱分离

答案：B

解析：毛细管电泳是现代测序（如Sanger测序）的核心技术，通过高分辨率分离荧光标记的片段。凝胶电泳主要用于核酸大小分选，沉淀法多用于核酸纯化。

3.在蛋白质印迹（WesternBlot）实验中，封闭步骤的主要目的是？（）

A.增加抗体结合位点

B.减少非特异性结合

C.提高抗体浓度

D.稳定蛋白质构象

答案：B

解析：封闭步骤通过非特异性抗体（如BSA、脱脂奶粉）占据膜表面，防止抗体非特异性吸附，提高实验特异性。

4.下列哪种酶可用于DNA连接反应？（）

A.DNaseI

B.RNA聚合酶

C.DNA聚合酶

D.T4DNA连接酶

答案：D

解析：T4DNA连接酶是常用的工具酶，催化平末端或粘性末端的DNA片段连接。DNaseI是核酸酶，RNA聚合酶用于转录，DNA聚合酶用于复制。

5.基因克隆中，限制性内切酶识别的序列通常具有？（）

A.随机分布

B.特定的回文结构

C.长度为50bp

D.高GC含量

答案：B

解析：限制性内切酶识别特定的回文序列，并在识别位点切割DNA，这是基因克隆的基础。

6.在细胞培养中，Luria-Bertani（LB）培养基主要用于？（）

A.厌氧培养

B.常规细菌培养

C.真菌培养

D.纤维母细胞培养

答案：B

解析：LB培养基是微生物通用培养基，提供碳源、氮源及生长因子，适用于大肠杆菌等细菌常规培养。

7.基因编辑技术CRISPR-Cas9中，Cas9蛋白的作用是？（）

A.拓扑异构酶

B.DNA连接酶

C.核酸内切酶

D.RNA聚合酶

答案：C

解析：Cas9是RNA引导的DNA内切酶，在gRNA指导下切割目标DNA。

8.在琼脂糖凝胶电泳中，核酸分子迁移速度主要受？（）

A.电场强度

B.琼脂糖浓度

C.核酸分子大小

D.核酸带电性质

答案：C

解析：核酸在凝胶中迁移速度与分子大小成反比，分子越小迁移越快。电场强度和琼脂糖浓度影响迁移速率，但分子大小是决定性因素。

9.下列哪种方法可用于RNA提取？（）

A.苯酚-氯仿法

B.沉淀法

C.超滤法

D.离子交换层析

答案：A

解析：苯酚-氯仿法能有效去除蛋白质并纯化RNA，是经典提取方法。沉淀法适用于DNA，超滤和层析多用于下游纯化。

10.在动物细胞培养中，常用的培养基添加物是？（）

A.胰岛素

B.胰高血糖素

C.甲状腺素

D.胰蛋白酶

答案：A

解析：胰岛素是细胞培养基的常规添加物，促进细胞生长。胰蛋白酶用于细胞消化，其他激素非必需。

二、填空题（每空1分，共10题）

1.PCR反应体系中，dNTPs是指______、______、______和______四种脱氧核苷三磷酸。

答案：dATP、dGTP、dCTP、dTTP

2.WesternBlot中，一抗通常是______，二抗是______。

答案：特异性抗体、酶标抗体

3.基因克隆载体常用的筛选标记有______和______。

答案：抗药性基因、报告基因（如β-半乳糖苷酶）

4.琼脂糖凝胶电泳中，核酸分子带负电荷，在电场中向______迁移。

答案：正极

5.CRISPR-Cas9系统中，gRNA是由______转录而来，引导Cas9识别目标序列。

答案：向导RNA（gRNA）模板

6.细胞培养中，Luria-Bertani（LB）培养基的基本成分包括______、______和______。

答案：胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠

7.蛋白质印迹（WesternBlot）中，膜封闭后需用______洗膜，去除非特异性结合。

答案：TBST或TBS（含0.1%Tween-20）

8.基因测序中，Sanger测序法依赖于______链终止法的原理。

答案：ddNTPs（双脱氧核苷酸）

9.限制性内切酶识别的序列通常具有______特性。

答案：回文结构

10.常用于RNA保护的RT-PCR实验中，RNA模板需用______处理以防止