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神经生长因子基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞的实验与机制研究

一、引言

1.1研究背景与意义

神经系统疾病严重威胁人类健康和生活质量，包括阿尔茨海默病、帕金森病、脊髓损伤、脑梗死等在内的多种神经系统疾病，给患者家庭和社会带来了沉重负担。尽管医学在不断进步，但目前对于许多神经系统疾病的治疗仍存在诸多挑战，患者的预后往往不理想，因此，寻找更为有效的治疗方法成为医学领域的迫切需求。

神经生长因子（NGF）作为最早被发现的神经营养因子家族成员，在神经系统中发挥着关键作用。NGF主要由神经细胞和星形胶质细胞合成，广泛分布于体内，尤其是在海马和大脑皮质含量丰富。它通过与神经元表面的酪氨酸激酶受体（Trk）家族成员结合，激活一系列信号转导途径，对神经元的生长、发育、存活和分化起着至关重要的调节作用。在神经损伤或疾病状态下，NGF能够诱导神经元轴突的延伸，促进神经纤维的修复和再生，增强神经元的抗凋亡能力，保护神经元免受氧化应激和细胞毒性物质的损伤，还能调节神经递质囊泡的合成和释放，提高神经元突触传递的效率，对神经功能的恢复具有积极意义。诸多研究表明，在阿尔茨海默病、帕金森病等神经退行性疾病的动物模型中，给予NGF可以改善神经功能，减少神经元损伤和炎症反应。然而，由于NGF不易透过血脑屏障，且半衰期较短，全身性给予时可能对其他组织的健康细胞产生毒性作用，这在很大程度上限制了其临床应用。

骨髓间充质干细胞（BMSCs）是一类存在于骨髓组织中的非造血干细胞，具有多向分化潜能和自我更新能力。BMSCs不仅能够分化为骨骼、软骨和脂肪等多种组织细胞，在特定条件下，还能在体外被诱导分化为神经细胞，为神经系统疾病的治疗提供了新的细胞来源。BMSCs还具有免疫调节功能，可抑制免疫系统过度反应，降低移植物抗宿主病的发生率，并能调节体内的炎症反应，这对于神经系统疾病中常见的神经炎症具有重要的调节作用。研究发现，BMSCs在中枢神经系统疾病的治疗中表现出积极效果，通过注射BMSCs，能够促进神经细胞的再生并减缓神经退行性疾病的进程。但其在治疗过程中也面临一些问题，如移植后的存活率较低，向神经细胞分化的效率有待提高等。

基因修饰技术的出现为解决NGF和BMSCs单独应用时的局限性带来了新的契机。通过基因修饰技术，将NGF基因导入BMSCs中，构建NGF基因修饰的BMSCs，有望实现两者的优势互补。一方面，BMSCs可以作为NGF的载体，将NGF持续、稳定地输送到神经系统病变部位，克服NGF难以透过血脑屏障和半衰期短的问题；另一方面，NGF在BMSCs内表达后，可能增强BMSCs的存活能力，促进其向神经细胞方向分化，提高治疗效果。这种联合策略为神经系统疾病的治疗开辟了新的途径，具有重要的理论意义和潜在的临床应用价值，有望为广大神经系统疾病患者带来新的希望。

1.2国内外研究现状

国内外学者针对NGF基因修饰BMSCs在神经系统疾病治疗方面展开了大量研究，并取得了一系列成果。在细胞分化和存活方面，众多研究表明NGF基因修饰对BMSCs具有积极影响。国内有研究抽取人源骨髓间充质干细胞，利用CRISPR/Cas9技术构建NGF过表达载体质粒，通过慢病毒技术转染BMSCs，结果显示，转染后的BMSCs中NGFmRNA的相对表达水平明显升高，且细胞向神经元细胞分化的能力增强，神经元特异性标志物的表达增加。国外相关研究也发现，将NGF基因导入BMSCs后，细胞在体外培养时表现出更好的存活能力和增殖活性，在模拟神经损伤的微环境中，其向神经样细胞分化的比例显著提高。

在神经系统疾病治疗的应用研究中，针对不同的神经系统疾病模型，NGF基因修饰BMSCs展现出一定的治疗效果。在脑梗死大鼠模型研究中，国内有团队采用线栓法制备大鼠脑梗死模型，将NGF基因修饰的BMSCs经尾静脉移植入模型大鼠体内，结果发现，与单纯BMSCs移植组和模型组相比，NGF-BMSCs移植组大鼠的神经功能缺损评分明显降低，脑组织损伤及细胞丢失减轻，梗死周边区域BrdU标记的移植细胞存活数量增多，神经细胞凋亡减少。国外学者在类似研究中也得到了相似结果，进一步证实了NGF基因修饰BMSCs对脑梗死具有较好的治疗作用。在脊髓损伤的研究中，有国内实验利用钳夹法构建大鼠急性脊髓损伤模型，将过表达NGF基因的BMSCs移植到损伤部位，发现模型大鼠的运动功能明显改善，后肢踏空率降低，脊髓修复程度优于对照组，表明NGF基因修饰BMSCs能有效促进急性脊髓损伤的修复。国外也有研究通过静脉移植NGF、BDNF基因修饰的BMSCs治疗脊髓损伤大鼠，结果显示，治疗后大鼠