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2025年PCR微生物培训考核试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.关于PCR技术的基本原理，以下描述错误的是：

A.通过高温变性使DNA双链解旋为单链

B.引物在退火阶段与模板DNA的特定区域互补结合

C.延伸阶段需要RNA聚合酶催化dNTP的连接

D.每个循环包括变性、退火、延伸三个步骤

答案：C（延伸阶段使用TaqDNA聚合酶，而非RNA聚合酶）

2.荧光定量PCR中，SYBRGreenI染料的作用机制是：

A.特异性结合目标DNA的引物区域

B.嵌入双链DNA的小沟并发出荧光

C.与探针的报告基团发生荧光共振能量转移

D.仅在目标DNA扩增时与单链结合发光

答案：B（SYBRGreenI通过嵌入双链DNA的小沟激发荧光，非特异性结合）

3.以下哪种物质会显著抑制TaqDNA聚合酶活性？

A.0.2mmol/L的Mg2+

B.100ng/μL的基因组DNA

C.0.1%的Tween-20

D.5mmol/L的EDTA

答案：D（EDTA可螯合Mg2+，而Mg2+是Taq酶的必需辅因子，高浓度EDTA会抑制酶活性）

4.设计细菌16SrRNA基因通用引物时，优先选择的区域是：

A.高度可变区（V1-V9）

B.保守区（如27F、1492R结合区域）

C.启动子区域

D.转录终止子区域

答案：B（通用引物需结合保守区以扩增多数细菌的16SrRNA基因）

5.PCR反应体系中，dNTP的最佳浓度范围通常为：

A.0.01-0.1mmol/L

B.0.1-0.5mmol/L

C.1-5mmol/L

D.5-10mmol/L

答案：B（dNTP浓度过高会抑制Taq酶活性，过低则影响扩增效率，常规推荐0.2mmol/L左右）

6.以下哪种操作会增加PCR污染风险？

A.在生物安全柜中配制反应体系

B.使用带滤芯的吸头

C.将扩增产物与试剂储存于同一冰箱

D.每次实验后用10%次氯酸钠擦拭工作台

答案：C（扩增产物含大量目标DNA，与试剂混存易导致气溶胶污染）

7.检测食品中沙门氏菌时，若样本经增菌后直接提取DNA进行PCR，可能出现假阳性的主要原因是：

A.增菌液中存在死菌的DNA

B.Taq酶活性不足

C.引物特异性差

D.退火温度过高

答案：A（死菌DNA未被降解时，PCR仍可扩增，导致假阳性）

8.数字PCR（dPCR）与荧光定量PCR（qPCR）的主要区别是：

A.dPCR无需标准曲线即可绝对定量

B.qPCR通过终点荧光强度定量

C.dPCR使用探针而非染料

D.qPCR对仪器精度要求更低

答案：A（dPCR通过微滴分割实现单分子扩增，直接计数阳性微滴，可绝对定量）

9.进行多重PCR时，引物设计的关键要求是：

A.所有引物的退火温度差异≤2℃

B.引物长度需严格一致（如均为20bp）

C.避免引物间形成发夹结构

D.目标片段长度差异需＞100bp

答案：A（多重PCR要求引物退火温度接近，否则会因扩增效率差异导致部分目标漏检）

10.以下哪种情况会导致PCR扩增产物出现非特异性条带？

A.模板DNA浓度过低

B.引物浓度过高

C.Mg2+浓度过低

D.延伸时间过短

答案：B（引物浓度过高易与非目标区域错配，导致非特异性扩增）

11.微生物PCR检测中，内参基因的主要作用是：

A.验证目标基因的扩增效率

B.排除样本中抑制物的干扰

C.提高目标基因的扩增特异性

D.减少引物二聚体的形成

答案：B（内参基因（如宿主看家基因）用于监测样本提取和扩增过程是否存在抑制物）

12.提取环境样本（如土壤）DNA时，加入PVPP（聚乙烯吡咯烷酮）的目的是：

A.裂解微生物细胞壁

B.去除腐殖酸等PCR抑制物

C.沉淀蛋白质

D.提高DNA纯度

答案：B（PVPP可吸附腐殖酸、多酚类物质，这些物质会抑制Taq酶活性）

13.荧光定量PCR的Ct值（循环阈值）是指：

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增产物浓度达到平台期的循环数

C.引物二聚体开始形成的循环数

D.荧光信号首次检测到的循环数

答案：A（Ct值定义为荧光信号达到设定阈值时的循环次数，与初始模板量成反比）

14.以下哪种微生物不适合用PCR直接检测？

A.活的但不可培养（VBNC）的大肠杆菌