将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定课件-高二生物人教版选择性必修3.pptxVIP

第2节基因工程的基本操作程序第2课时将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定第3章基因工程SW-PWF

基因工程的基本操作程序目的基因的筛选与获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞第一步第二步第三步第四步目的基因的检测与鉴定

第三步、将目的基因导入受体细胞基因表达载体受体细胞导入动物植物微生物将目的基因导入不同受体细胞的方法有何不同？

(一)将目的基因导入植物细胞用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；(2)操作方法：方法1：花粉管通道法(1)实例:我国科学家独创的一种方法，将Bt基因导入棉花细胞。培育出了“转基因抗虫棉”A.子房注射：花粉管通道法导入外源DNA

在植物授粉后一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴在花柱切面，使目的基因通过花粉管通道进入胚囊。B.花柱滴加：花粉落到柱头上刺激花粉管萌发并生长至子房滴管蘸取外源DNA溶液涂抹雌蕊柱头外源DNA沿花粉管通道进入胚囊外源DNA进入受精卵DNA随机整合(一)将目的基因导入植物细胞

萌发的花粉管花柱子房胚囊卵细胞柱头利用植物授粉后形成的天然花粉管通道，将外源基因携带进入胚囊，此时的受精卵未形成细胞壁，且正在进行活跃的DNA复制，容易将外源DNA片段整合到受体基因组中。操作简单、技术成本低，免去了组织培养以及诱导再生植株的全套人工培养过程。(3)原理：(一)将目的基因导入植物细胞(4)优点：

a.农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染______植物和____植物，对大多数＿＿＿植物没有侵染能力。(1)转化：方法2：农杆菌转化法是指目的基因受体细胞内，并在受体细胞内＿＿＿＿＿＿的过程。进入稳定维持和表达(2)农杆菌的特点：双子叶裸子单子叶(一)将目的基因导入植物细胞实质是基因重组

(2)农杆菌的特点：b.农杆菌细胞内含有，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的上。Ti质粒T-DNA染色体DNA(一)将目的基因导入植物细胞Ti质粒T-DNA农杆菌当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞

(3)过程：插入Ti质粒的中，形成。导入,目的基因插入植物细胞的上目的基因在植物细胞中。转入,组织培养技术(一)将目的基因导入植物细胞目的基因T-DNA重组Ti质粒农杆菌植物细胞染色体DNA维持稳定和表达两次拼接、两次导入?

Ti质粒目的基因构建表达载体含目的基因的重组Ti质粒转入农杆菌含重组Ti质粒的农杆菌植物细胞导入植物细胞表现出新性状的植物将目的基因插入染色体DNA中农杆菌转化法

(一)将目的基因导入植物细胞①两次拼接第一次拼接：目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上；第二次拼接(非人工操作)：被插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。

(一)将目的基因导入植物细胞②两次导入第一次导入：将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌；第二次导入(非人工操作)：含目的基因的T-DNA导入受体细胞。

a.可以将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株。b.可以将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等。(5)具体转化方法：(一)将目的基因导入植物细胞受精卵或体细胞(4)受体细胞：

研究人员将两个抗虫基因(T)导入棉花细胞内培育转基因抗虫棉。那么两个抗虫基因在染色体上随机整合有几种情况？转两个T基因普通棉花细胞甲乙丙思考·讨论有三种情况，如右图所示。若甲、乙、丙三种植株自交，其后代抗虫与不抗虫的比例为多少？甲自交→全为抗虫乙自交→抗虫：不抗虫=3:1丙自交→抗虫：不抗虫=15:1

方法1：显微注射法(二)将目的基因导入动物细胞(2)操作程序：(1)受体细胞：构建基因表达载体并提纯动物的受精卵中显微注射早期胚胎获得具有新性状的动物胚胎移植受精卵雌性动物输卵管或子宫①个体大，易操作。②受精卵全能性高，易培养成完整个体。显微注射技术

受精卵注射器固定吸管显微注射仪

方法2：病毒介导法:(二)将目的基因导入动物细胞科学家用病毒DNA与目的基因一起构建的载体，去感染受体动物细胞，也能使目的基因导入动物细胞内。如用腺病毒载体，搭载新冠病毒S基因，进入人体内，使人体产生对S蛋白的免疫记忆。

在基因工程操作中，常用作为受体细胞，其中以最广泛。(1)目的:(2)受体细胞：(三)将目的基因导入微生物细胞方法1：Ca2+处理:可使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理