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菊花再生体系构建及GhEREB2基因遗传转化探究

一、引言

1.1研究背景

菊花（Chrysanthemum×morifolium），作为菊科菊属的多年生宿根花卉，在花卉领域占据着极为重要的地位。其品种繁多，全世界约有20000-30000个品种，中国也拥有3000多个品种。菊花不仅花色丰富，涵盖了白色、黄色、红色、紫色等多种色彩，花型也是形态各异，有平瓣、管瓣、桂瓣、匙瓣和畸瓣等类型，具有极高的观赏价值，常被用于配置花境、花坛，制作盆栽，还是重要的鲜切花材料。

除观赏价值外，菊花还具备显著的经济价值。在药用方面，菊花的花朵、叶、幼嫩茎叶以及根等均具有一定药用功效，可主治外感风热、发热头痛、喉咙肿痛等症状。现代研究还发现菊花含有黄酮类化合物、挥发油、糖类、氨基酸等多种营养物质，对人体有预防心血管疾病、增强免疫力等保健作用。在食用领域，菊花可用来制作茶叶、蜜饯、蜂蜜、菊花酒等多种食品和饮品，口感清香爽口，深受消费者喜爱。菊花产业链的完善，也带动了相关产业的发展，创造了更多的就业机会，促进了经济增长。

然而，传统的菊花育种方法存在一定的局限性。例如，杂交育种虽能组合双亲的优良性状，但受亲本性状、杂交结实率低及环境因素等影响较大，且育种周期较长。诱变育种存在有利变异少、变异方向难以预测、部分性状遗传不稳定等缺点。随着人们对菊花品种的需求日益多样化，传统育种方法已难以满足市场对菊花花色、花型、抗逆性等多方面的要求。

基因工程技术的发展为菊花品种改良带来了新的契机。通过基因工程，可以将特定的外源基因导入菊花基因组中，定向改变菊花的某些性状，如增强其抗逆性、改善花色和花型等，从而突破传统育种的瓶颈，培育出更符合市场需求的菊花新品种。这不仅能够丰富菊花的遗传多样性，还能推动菊花产业的可持续发展。

1.2菊花再生体系研究现状

菊花再生体系的建立是实现基因工程遗传转化的重要基础。目前，常用的菊花再生方法主要是植物组织培养技术，该技术利用菊花植物的离体组织或器官，在无菌条件下进行培养，使其再生出新的植株。

在选择外植体时，常见的有叶片、茎段、花瓣、茎尖等。不同的外植体在再生能力上存在差异，例如叶片来源广泛，操作相对简便，是较为常用的外植体之一；茎尖则具有较高的再生频率，且能有效保持母本的遗传特性，常用于脱毒苗的培育。

影响菊花再生的因素众多，培养基的成分是关键因素之一。MS培养基是菊花组织培养中常用的基本培养基，在此基础上，添加不同种类和浓度的植物激素，如生长素（如2,4-D、NAA等）、细胞分裂素（如6-BA、KT等），能够调节外植体的生长和分化。不同激素的配比对外植体的脱分化和再分化过程有着显著影响，例如较高浓度的生长素有利于愈伤组织的诱导，而适当比例的细胞分裂素和生长素组合则能促进不定芽的分化。光照、温度、湿度等培养环境条件也对菊花再生起着重要作用。适宜的光照强度和时间能够促进光合作用，为外植体的生长和分化提供能量和物质基础；温度一般控制在25℃左右，有利于细胞的正常代谢和生理活动；湿度保持在70%-80%，可避免外植体过度干燥或因湿度过高而滋生杂菌。

菊花再生体系在实际应用中取得了一定成果。通过建立高效的再生体系，能够实现菊花的快速繁殖，缩短育种周期，提高繁殖效率，满足市场对优质菊花种苗的大量需求。再生体系也为菊花的遗传改良提供了技术支持，使得基因工程等现代生物技术在菊花品种改良中得以应用。

1.3GhEREB2基因研究现状

GhEREB2基因最初是从棉花中分离得到的，属于EREBP转录因子家族的B3亚族。该基因编码的蛋白含有一个高度保守的AP2/EREBP结构域、一个核定位信号和一个激活域，这些结构使其能够特异性地识别并结合GCC-box等顺式作用元件，从而调控下游基因的表达。

在植物抗逆方面，GhEREB2基因发挥着重要作用。研究表明，该基因的表达能够被乙烯、茉莉酸（JA）等植物激素诱导，且乙烯诱导的强度大于JA，但JA处理时，GhEREB2基因mRNA积累的速度较快。干旱和低温等非生物胁迫也能诱导GhEREB2基因的表达，使其参与到植物对逆境的响应过程中。将GhEREB2基因转入拟南芥后，转基因拟南芥在干旱和低温条件下的生长状况明显优于野生型，表现出更强的抗逆性。这说明GhEREB2基因可能作为一个正调控的转录因子，参与生物和非生物胁迫的信号转导途径，通过调控相关基因的表达，提高植物对逆境的适应能力。

在菊花遗传转化中的应用研究相对较少，但鉴于GhEREB2基因在植物抗逆方面的显著功能，将其导入菊花中，有望增强菊花的抗逆性，如提高其抗旱、抗寒等能力，从而扩大菊花的种植范围，降低因逆境胁迫造成的损失，为菊花产业的稳定发展提供保障。

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