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检验科人才PCR技术试卷与答案

一、单选题（每题2分，共30分）

1.PCR技术的基本反应步骤不包括（）

A.变性

B.退火

C.延伸

D.连接

答案：D

解析：PCR技术的基本反应步骤包括变性、退火和延伸，连接不是PCR的基本反应步骤。变性是使双链DNA解开成单链；退火是引物与单链DNA模板结合；延伸是在DNA聚合酶作用下合成新的DNA链。

2.在PCR反应中，引物的作用是（）

A.提供模板

B.提供3-OH末端，供DNA聚合酶延伸

C.提供5-OH末端，供DNA聚合酶延伸

D.激活DNA聚合酶

答案：B

解析：引物是一小段单链DNA或RNA，它能与模板DNA互补配对，为DNA聚合酶提供3-OH末端，使DNA聚合酶能够从这个末端开始延伸合成新的DNA链。

3.PCR反应中，TaqDNA聚合酶的最适温度是（）

A.55℃

B.72℃

C.94℃

D.60℃

答案：B

解析：TaqDNA聚合酶是一种耐热的DNA聚合酶，其最适温度约为72℃，在这个温度下它具有较高的活性，能够高效地催化DNA链的延伸。

4.以下哪种物质不是PCR反应体系的必需成分（）

A.dNTP

B.引物

C.模板DNA

D.连接酶

答案：D

解析：PCR反应体系的必需成分包括模板DNA、引物、dNTP（脱氧核苷三磷酸）、DNA聚合酶和缓冲液等。连接酶主要用于连接DNA片段，不是PCR反应体系的必需成分。

5.PCR反应中，变性温度一般为（）

A.55℃

B.72℃

C.94℃

D.60℃

答案：C

解析：变性温度通常为94℃左右，在这个温度下，双链DNA分子的氢键断裂，解开成单链，为后续引物的结合和DNA聚合酶的延伸提供模板。

6.引物设计时，引物的长度一般为（）

A.510bp

B.1530bp

C.3050bp

D.50100bp

答案：B

解析：引物长度一般在1530bp之间。引物过短，特异性较差，容易与非目标序列结合；引物过长，合成成本增加，且可能导致退火效率降低。

7.在PCR反应中，循环次数一般为（）

A.510次

B.1020次

C.2535次

D.4050次

答案：C

解析：循环次数一般设置为2535次。循环次数过少，扩增产物量不足；循环次数过多，可能会导致非特异性扩增增加，同时也会增加实验时间和成本。

8.以下关于实时荧光定量PCR的描述，错误的是（）

A.可以对PCR产物进行实时监测

B.不需要引物

C.可以定量检测核酸的起始量

D.常用的荧光标记方法有SYBRGreenI法和TaqMan探针法

答案：B

解析：实时荧光定量PCR同样需要引物。它是在PCR反应体系中加入荧光基团，通过对荧光信号的实时监测来实现对PCR产物的定量分析。常用的荧光标记方法有SYBRGreenI法和TaqMan探针法，能够定量检测核酸的起始量。

9.SYBRGreenI法实时荧光定量PCR中，SYBRGreenI能与（）结合。

A.双链DNA

B.单链DNA

C.RNA

D.蛋白质

答案：A

解析：SYBRGreenI是一种荧光染料，它能与双链DNA结合，结合后荧光信号增强，通过检测荧光信号的强度可以反映双链DNA的扩增情况。

10.TaqMan探针法实时荧光定量PCR中，TaqMan探针的5端标记（），3端标记（）。

A.荧光报告基团，荧光淬灭基团

B.荧光淬灭基团，荧光报告基团

C.放射性标记物，荧光标记物

D.生物素，地高辛

答案：A

解析：TaqMan探针的5端标记荧光报告基团，3端标记荧光淬灭基团。当探针完整时，报告基团发射的荧光被淬灭基团吸收；在PCR延伸过程中，TaqDNA聚合酶的5-3外切酶活性将探针切断，报告基团与淬灭基团分离，荧光信号释放，从而实现对PCR产物的监测。

11.逆转录PCR（RTPCR）的第一步是（）

A.以RNA为模板合成cDNA

B.以cDNA为模板进行PCR扩增

C.提取RNA

D.设计引物

答案：A

解析：逆转录PCR（RTPCR）首先要以RNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA，然后再以cDNA为模板进行PCR扩增。

12.多重PCR是指（）

A.在一个反应体系中同时扩增多个靶序列

B.进行多次PCR反应

C.使用多种DNA聚