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基于单细胞RNA-seq解析小鼠肾小球固有细胞必需基因：方法、发现与展望

一、引言

1.1研究背景与意义

肾小球作为肾脏的基本功能单位，承担着维持机体水盐平衡、过滤代谢废物等重要生理功能，对维持身体健康起着至关重要的作用。然而，肾小球疾病在全球范围内的发病率居高不下，严重威胁着人类的健康。据统计，慢性肾脏病（CKD）在全球成年人群中的患病率约为10%-15%，而肾小球疾病是导致CKD的主要原因之一。常见的肾小球疾病如肾小球肾炎，患者不仅会出现明显的血尿、蛋白尿，同时还有可能会产生头晕、头痛、少尿、肾功能损伤症状，如果情况比较严重，没有及时对症调理治疗，可能会导致低蛋白血症出现，也有可能会产生肾功能衰竭。肾小球疾病还会对肾脏产生持续刺激，导致肾功能减退，后期还有可能会出现凝血功能异常或钙磷代谢紊乱。若患者的身体体质较差，还有可能会产生心血管疾病，比如出现高血压、动脉粥样硬化性心脏病等各种疾病，影响身体恢复。

深入理解肾小球疾病的发病机制，是开发有效治疗策略的关键。肾小球固有细胞，包括内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞等，是肾小球结构和功能的基础，它们的正常功能维持对于肾小球的正常运作至关重要。这些固有细胞的功能异常或基因表达改变，往往是肾小球疾病发生发展的根源。明确肾小球固有细胞的必需基因，能够从分子层面揭示肾小球的正常生理机制以及疾病状态下的病理变化，为肾小球疾病的诊断、治疗和预防提供坚实的理论基础。

单细胞RNA测序（scRNA-seq）技术的出现，为生命科学研究带来了革命性的变化。传统的RNA测序技术是基于细胞群体进行分析，所得到的结果是细胞群体的平均基因表达水平，这就导致细胞之间的异质性信息被掩盖，无法深入了解单个细胞的独特生物学特性。而scRNA-seq技术能够在单细胞水平上对基因表达进行精确测定，全面揭示细胞间的异质性，深入解析细胞的分化、发育以及疾病发生发展过程中的分子机制。在肾小球疾病研究领域，scRNA-seq技术能够帮助我们精准识别不同类型的肾小球固有细胞，深入探究它们在疾病状态下的基因表达变化和信号通路激活情况，从而挖掘出潜在的治疗靶点和生物标志物，为肾小球疾病的个性化治疗开辟新的道路。本研究借助scRNA-seq技术对小鼠肾小球固有细胞的必需基因展开分析，旨在为肾小球疾病的发病机制研究提供全新的视角，为临床治疗提供更具针对性的理论依据。

1.2小鼠肾小球固有细胞概述

小鼠肾小球作为肾脏的关键组成部分，其结构和功能与人类肾小球具有高度的相似性，因此在肾脏疾病研究中，小鼠常被用作重要的模式生物。肾小球的固有细胞主要包括内皮细胞、系膜细胞和上皮细胞，这些细胞紧密协作，共同维持着肾小球的正常结构和生理功能。

肾小球内皮细胞是衬贴于肾小球毛细血管腔的单层扁平上皮细胞，直接与血液接触，是血液中各种病理生理因素作用的自然靶细胞。其细胞体布满直径70-100nm的窗孔，呈开放状态，窗孔面积约占肾小球面积54%，这种特殊结构使内皮细胞能够阻拦血液中血细胞等有形成分，选择性截留血液中的大分子物质，是肾小球毛细血管壁的首道屏障。内皮细胞还参与肾小球基膜有关成分的合成与修复，在调控肾小球内凝血、免疫反应和炎症过程中发挥着重要作用，例如，它可结合凝血因子IXa、因子Xa，合成并释放凝血因子VIII、血管紧张素转换酶等多种物质。

系膜细胞位于肾小球毛细血管袢的中央部位，与周围的系膜基质共同组成系膜区。在光镜下，系膜细胞核小而圆，染色极深，细胞质与系膜基质融合不易区分；电镜下呈星形，表面有多数长短不一的突起，较长突起可伸到内皮下甚至深入毛细血管腔。系膜细胞具有调节肾小球毛细血管袢收缩或舒张的作用，可改变肾小球毛细血管的滤过面积及压力通透性，从而局部调节肾小球的血流动力学改变。此外，它还具备吞噬或清洁功能、参与免疫反应或对肾小球局部损伤的反应，以及迁移功能，其产生的系膜基质对肾小球毛细血管袢有支持和保护作用。

上皮细胞，又称足细胞，是肾小球脏层上皮细胞，是肾小球中体积最大的终末分化细胞。足细胞贴伏于肾小球基底膜外侧，由细胞体、主突和足突三部分组成，足突通过α3β1整合素复合体和αβ蛋白聚糖复合体连接于肾小球基底膜上。光镜下足细胞核较大，着色较浅，并凸向肾小囊腔；电镜下可见足细胞从细胞体伸出几个大的突起，再依次分出次级突起，有的还分出三级突起，不同细胞间的足突相嵌交叉形成裂隙，裂隙之间的裂孔隔膜是肾小球滤过膜的重要组成部分。足细胞可通过合成和分泌肾上腺髓质肽抑制系膜细胞增殖，对保持肾小球微环境稳定至关重要，并参与肾小球的炎症过程。

这些肾小球固有细胞相互关联、相互影响，共同构成了肾小球滤过屏障，确保肾小球正常行使滤过功能，对维持机体内环境的稳定起着不可或缺的作用。任何一种固有细胞的功能