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产前诊断宫颈癌细胞学检测操作指南

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目录

01

样本采集规范

02

样本处理流程

03

染色操作标准

04

镜检分析规程

05

报告签发规范

06

质控管理要求

01

样本采集规范

采样器械选择标准

专用宫颈刷材质要求

采用医用级高分子材料制成，刷毛柔软且密集，确保能有效收集宫颈脱落细胞而不损伤黏膜组织，刷柄需标注刻度以控制插入深度。

一次性使用验证标准

所有采样器械须具备独立灭菌包装，包装完整性检测需通过EO残留量、无菌试验等六项质量控制指标。

无菌采样器规格参数

采样器直径应符合国际标准（5-7mm），表面需经等离子处理降低粘附性，配套密封管需含细胞保存液且通过生物相容性认证。

宫颈转化区定位方法

细胞学联合解剖定位法

结合宫颈管搔刮术获取的柱状上皮细胞分布情况，与宫颈外口12点方位标记法进行双重验证定位。

阴道镜下鳞柱交界识别技术

使用5%醋酸溶液染色后，通过绿光滤镜观察宫颈表面血管形态变化，准确识别新旧鳞柱交界区域的三维边界。

碘染色辅助定位方案

采用Lugol碘液进行Schiller试验，未着色区域精确标记转化区范围，需注意排除炎症或萎缩导致的假阳性区域。

标准化取样操作手法

旋转取样技术规范

将采样刷置于宫颈外口，顺时针旋转5圈保持恒定压力（200-300g），旋转时需确保刷毛与宫颈表面呈45°接触角。

多重质量控制步骤

取样后需进行样本肉眼评估（血性成分＜30%），同步填写采样质量评分表（包括宫颈暴露度、出血量等五项指标）。

细胞转移保存流程

取样后立即将刷头浸入保存液，沿管壁反复挤压10次使细胞脱落，保存液需维持pH值在6.8-7.2范围内。

02

样本处理流程

玻片制备技术要点

样本均匀涂布

确保宫颈脱落细胞均匀分布于玻片表面，避免堆积或过薄，涂布角度应保持30-45度以维持细胞完整性。

标记与编号规范

每张玻片需清晰标注患者唯一标识符，采用防脱落标签或刻蚀技术，避免样本混淆或信息丢失。

厚度控制标准

涂片厚度应控制在单层细胞覆盖，过厚可能导致染色不均，过薄则影响诊断敏感性，需通过显微镜初检调整。

细胞固定液使用规范

固定液选择与配比

推荐使用95%乙醇或甲醇基固定液，需严格按比例稀释，避免因浓度偏差导致细胞收缩或膨胀变形。

固定时间与温度

定期监测固定液pH值及透明度，出现浑浊或沉淀需立即更换，避免交叉污染或固定效能下降。

样本需在采集后立即固定，时间不少于15分钟且不超过24小时，环境温度维持在20-25℃以确保固定效果稳定。

固定液更换周期

转运条件与时效控制

使用专用防震容器装载玻片，内衬缓冲材料，避免运输途中震动导致细胞脱落或玻片碎裂。

转运过程中需实时记录温湿度数据，温度应保持在4-30℃，湿度低于70%以防止样本霉变或降解。

优先处理高危或疑似阳性样本，普通样本需在48小时内完成转运，超时需重新评估样本有效性并记录原因。

防震包装要求

温湿度监控

时效优先级管理

03

染色操作标准

巴氏染色液配置比例

苏木精染液配制

采用高纯度苏木精晶体与氧化剂按1:5比例混合，溶解于乙醇与蒸馏水混合溶剂中，静置充分氧化后过滤使用，确保细胞核染色清晰锐利。

伊红染液浓度控制

分化液与蓝化液配比

将水溶性伊红染料配制成0.5%浓度溶液，加入1%冰醋酸调节pH至4.5-5.0，增强胞质着色对比度。

盐酸乙醇分化液按1%盐酸与70%乙醇混合，蓝化液采用0.2%氨水溶液，两者需严格校准浓度以避免过染或脱色。

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2

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苏木精浸染阶段

盐酸分化时间不超过10秒，立即流水冲洗终止反应；氨水蓝化30秒至1分钟，恢复细胞核中性pH环境。

分化与返蓝处理

伊红复染时长

浸染1-2分钟，通过梯度乙醇脱水时观察胞质粉红色饱和度，避免过度染色掩盖核细节。

载玻片浸染时间控制在5-8分钟，依据染液新旧程度调整，显微镜下观察细胞核呈深紫色为佳。

分层染色时间控制

分色与脱水关键步骤

梯度乙醇脱水

依次通过70%、80%、95%及无水乙醇各1分钟，彻底去除水分，二甲苯透明前需确保无水乙醇纯度≥99.7%。

中性树胶封片

滴加树胶时避免气泡产生，盖玻片覆盖后轻压排除多余胶体，室温静置固化24小时以保证永久保存质量。

二甲苯透明处理

两次二甲苯浸泡各3分钟，消除乙醇残留并增强样本透光度，操作需在通风橱中进行。

04

镜检分析规程

系统性扫描路径设计

Z字形扫描法

自动化辅助定位

采用从左至右、自上而下的Z字形路径覆盖玻片全区域，确保无视野遗漏，同时避免重复扫描造成的效率降低。

分层聚焦策略

优先低倍镜（10×）快速筛查可疑区域，再切换高倍镜（40×）对目标区域进行细节确认，平衡检测速度与准确性。

结合数字病理扫描系统预设坐标网格，标记高风险区域（如转化区），提高人工复检的针对性。

细胞核体积显著增大（超过胞