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基因组改组技术赋能荨麻青霉改良：灰黄霉素高产菌株的选育探索

一、引言

1.1研究背景

灰黄霉素（Griseofulvin）是一种具有重要应用价值的抗真菌药物，自1939年被发现以来，在医药领域发挥着关键作用。它主要通过干扰真菌核酸的合成，抑制真菌的生长和繁殖，对毛发癣菌、小孢子菌、表皮癣菌等浅部真菌具有良好的抗菌活性，因而广泛应用于各种癣病的治疗，包括头癣、须癣、体癣、股癣、足癣和甲癣等。尽管随着新型抗真菌药物如伊曲康唑、特比萘芬等的出现，灰黄霉素因其副作用（如肝肾功能损害、胃肠道不适、精神方面的影响等）在部分地区的使用有所减少，但在一些特定情况下，它仍是重要的治疗选择，例如对某些对新型药物耐药的真菌菌株，灰黄霉素仍能发挥疗效。

荨麻青霉（PenicilliumurticaeBainier）作为灰黄霉素的主要产生菌，在灰黄霉素的工业化生产中占据核心地位。然而，目前荨麻青霉在实际生产应用中面临诸多挑战。一方面，其发酵周期较长，这不仅增加了生产成本，还延长了生产周期，降低了生产效率，在大规模工业化生产中，时间成本的增加会显著影响企业的经济效益和市场竞争力；另一方面，野生型荨麻青霉的灰黄霉素产量相对较低，难以满足日益增长的市场需求。传统的育种方法如诱变育种、杂交育种等虽然在一定程度上对荨麻青霉进行了改良，但存在效率低、随机性大、难以实现多个优良性状同时聚合等问题。因此，开发新的高效育种技术，对荨麻青霉进行改良，以提高灰黄霉素的产量和生产效率，降低生产成本，成为当前亟待解决的问题。

1.2基因组改组技术概述

基因组改组（Genomeshuffling）技术是20世纪末发展起来的一种新型菌种选育技术，它建立在原生质体融合技术的基础之上，融合了传统诱变育种和细胞融合技术的优势。该技术的基本原理是首先选择一个原始亲株，通过经典的诱变育种方法，如物理诱变（紫外线、X射线等）、化学诱变（亚硝酸、甲基磺酸乙酯等），获得多个表型得到提高的菌株，构建突变候选株文库。然后，以这些表型提高的菌株作为首轮多亲本融合的直接亲株，进行多亲株融合。在融合过程中，利用原生质体融合技术，使不同菌株的全基因组进行随机重组，获得第一代融合株。接着，从第一代融合株中选择表型获得进一步提高的菌株作为下一轮融合的直接亲本，依此类推进行多轮的多亲株融合。最终，从获得的突变体库中筛选出性状被提升的目的菌株。

与传统育种技术相比，基因组改组技术具有显著优势。传统诱变育种虽然能够产生基因突变，但突变的方向难以控制，且通常只能获得单个或少数几个性状的改变，工作量大且效率低；杂交育种则受到亲本亲缘关系的限制，难以实现远缘物种间的基因重组。而基因组改组技术通过多轮多亲本融合，能够实现多个优良性状的快速聚合，大幅提高子代菌株的遗传多样性，为筛选优良菌株提供了丰富的资源。例如，在泰乐菌素生产菌弗氏链霉菌（Streptomycesfradiae）的选育中，利用基因组改组技术经过四轮无选择性条件的原生质体融合再生，后代中带有多重正向进化标记重组子出现的几率是采用原始诱变育种方法的40-10万倍；经过两轮原生质体融合，历经1年时间、2.4万株的筛选量，所获得的重组株产泰乐菌素的能力，高于传统诱变方法20年、100万株筛选所获得的菌株。这充分展示了基因组改组技术在菌种选育上能够大幅度缩短选育周期，提高菌株进化几率，增加获得高产突变菌株的机会。

1.3研究目的与意义

本研究旨在利用基因组改组技术，对灰黄霉素产生菌荨麻青霉进行改良，筛选出发酵周期较短或效价较高的荨麻青霉菌株，以解决当前灰黄霉素生产中存在的生产周期长、产量低等问题。

从生产角度来看，选育出的优良荨麻青霉菌株若能缩短发酵周期，将有效提高生产效率，减少生产过程中的能源消耗、设备占用时间等成本，增加企业的经济效益；而效价的提高则意味着在相同的生产条件下能够获得更多的灰黄霉素产品，满足市场对灰黄霉素的需求，提升企业在市场中的竞争力。这对于推动灰黄霉素的工业化生产，保障抗真菌药物的稳定供应具有重要意义。

从科研角度而言，基因组改组技术在荨麻青霉改良中的应用研究，有助于深入了解该技术在丝状真菌育种中的作用机制和应用效果，丰富微生物育种的理论和实践经验。同时，通过对改组菌株的遗传分析和代谢研究，可以揭示荨麻青霉中与灰黄霉素合成相关的基因和代谢途径，为进一步通过基因工程等手段对荨麻青霉进行精准改造提供理论基础，推动微生物遗传育种技术的发展。

二、荨麻青霉及灰黄霉素概述

2.1荨麻青霉的生物学特性

荨麻青霉（PenicilliumurticaeBainier）属于真菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丝孢科、青霉属，在自然界中主要分布于土壤、腐烂植物体和羊粪等基质上。

在形态方面，荨麻青霉菌落生长相对较