DB36_T 1512-2021 DNA条形码鉴定四种茄属种质技术规程.docxVIP

ICS67.080.20

CCSB30

DB36

江西省地方标准

DB36/T1512—2021

DNA条形码鉴定四种茄属种质技术规程

TechnicalrulesforidentificationoffourSolanumspeciesbasedonDNAbarcode

2021-12-14发布2022-06-01实施

江西省市场监督管理局发布

I

DB36/T1512—2021

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4方法原理 2

5仪器设备、主要试剂耗材及参照种质 2

6DNA条形码序列的获取 2

7DNA条形码比对及结果判定 3

附录A（资料性）参照种质 4

附录B（资料性）引物序列 5

附录C（资料性）条形码参考序列 6

附录D（资料性）主要仪器设备与试剂、耗材 8

附录E（资料性）溶液配制 10

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II

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由江西省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：江西省农业科学院蔬菜花卉研究所。

本文件主要起草人：袁欣捷、方荣、陈学军、周坤华、雷刚、黄月琴、郭丽虹。

DB36/T1512—2021

1

DNA条形码鉴定四种茄属种质技术规程

1范围

本文件规定了茄属喀西茄（Solanumaculeatissimum）、栽培茄（S.melongena）、蒜芥茄（S.sisymbriifolium）和水茄（S.torvum）等种质的术语和定义、方法原理、仪器设备、主要试剂耗材及参考种质、DNA条形码序列的获取以及DNA条形码比对及结果判定。

本文件适用于茄属喀西茄、栽培茄、蒜芥茄和水茄的DNA条形码鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

SN/T4625DNA条形码筛选与质量要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

待测茄属种质testedSolanumgermplasm

由送检人提供的待鉴定的疑似喀西茄、栽培茄、蒜芥茄或水茄的种质。

3.2

参照茄属种质referenceSolanumgermplasm

用于与待测种质进行PCR扩增片段大小比较或DNA条形码比对的标准种质，喀西茄为改良托鲁巴姆，栽培茄为赣茄1号，蒜芥茄为HC003，水茄为HC002（参照种质见附录A）。

3.3

DNA条形码DNAbarcode

生物体内能够代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段,如matK和psbA-trnH。

注1：matK基因：植物叶绿体中赖氨酸tRNA内含子内的成熟酶（参与RNA转录本中II型内含子剪切）编码基因。

本标准DNA条形码matK的筛选与质量要求，参照SN/T4625的规定执行。

注2：psbA-trnH：植物叶绿体psbA基因和trnH基因间的间隔序列。本标准DNA条形码psbA-trnH的筛选与质量要求，参照SN/T4625的规定执行。

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2

4方法原理

根据茄属种质的matK或psbA-trnH序列特征，应用DNA条形码技术对喀西茄、栽培茄、蒜芥茄或水茄等茄属种质进行鉴定。DNA条形码引物相关信息见附录B，DNA条形码序列相关信息见附录C。

5仪器设备、主要试剂耗材及参照种质

参照种质参见附录A，仪器设备及试剂、耗材参见附录D，溶液配制方法参见附录E。

6DNA条形码序列的获取

6.1样品准备

取0.2g～0.5g待测种质或参照种质的植物组织置于2mL离心管中，做好标记。

6.2DNA提取

6.2.1改良CTAB法提取DNA

待测种质采用改良CTAB法提取DNA，步骤为：

a）取直径为6mm钢珠2粒放入装有样品的2mL离心管中，加入预热至6