双重作用AChE抑制剂的设计、合成、生物活性及纳洛酮合成工艺改进研究.docxVIP

双重作用AChE抑制剂的设计、合成、生物活性及纳洛酮合成工艺改进研究

一、双重作用AChE抑制剂的设计、合成与生物活性研究

（一）设计思路

基于阿尔茨海默病（AD）复杂的病理机制，单一靶点药物难以有效改善病情，因此设计具有双重作用的乙酰胆碱酯酶（AChE）抑制剂。选取AChE活性位点和淀粉样蛋白（Aβ）聚集抑制位点为双作用靶点，以已上市AChE抑制剂多奈哌齐的哌啶环结构为AChE结合母核，引入具有Aβ聚集抑制活性的香豆素衍生物结构片段，通过柔性亚甲基链连接两个活性基团，形成“母核-连接链-活性片段”的分子结构。同时，对连接链长度（n=2-4）和香豆素环上取代基（羟基、甲氧基）进行优化，增强分子与靶点的结合亲和力和选择性。

（二）合成路线

中间体1（4-哌啶甲醛）的合成：以4-甲基吡啶为原料，经高锰酸钾氧化生成4-吡啶甲酸，再通过硼氢化钠还原得到4-哌啶甲醇，最后经二氧化锰氧化制备4-哌啶甲醛，产率约78%。

中间体2（香豆素衍生物）的合成：采用Pechmann缩合反应，以间苯二酚（或间甲氧基苯酚）与乙酰乙酸乙酯为原料，在浓硫酸催化下回流反应4-6小时，得到7-羟基香豆素（或7-甲氧基香豆素），产率分别为85%和82%。

目标化合物的合成：将中间体1与中间体2在无水乙醇中混合，加入哌啶作为催化剂，回流反应8-10小时，通过Schiff碱反应形成C=N双键，连接两个活性片段，经柱层析纯化（洗脱剂：乙酸乙酯-石油醚=1:3）得到目标化合物（共6个衍生物），总产率45%-58%。

（三）生物活性测试

AChE抑制活性：采用Ellman法，在96孔板中测定目标化合物对人重组AChE的抑制率，计算半数抑制浓度（IC??）。结果显示，7-羟基香豆素-哌啶衍生物（连接链n=3）的IC??为0.08μmol/L，优于阳性对照多奈哌齐（IC??=0.12μmol/L），表明其对AChE具有强效抑制作用。

Aβ聚集抑制活性：通过硫代黄素T（ThT）荧光法，检测化合物对Aβ????聚集的抑制效果。上述最优衍生物在10μmol/L浓度下，对Aβ????聚集的抑制率达62%，且能减少纤维状Aβ的形成（透射电镜观察验证），说明其可同时抑制AChE活性和Aβ聚集。

细胞毒性测试：以SH-SY5Y神经细胞为模型，采用MTT法检测化合物毒性。在20μmol/L浓度下，细胞存活率仍保持85%以上，表明该类化合物具有良好的细胞相容性。

二、纳洛酮合成工艺改进研究

（一）传统工艺存在的问题

纳洛酮作为阿片受体拮抗剂，传统合成以蒂巴因为原料，需经乙酰化、氧化、还原、去甲基化等多步反应，存在以下不足：1.氧化步骤使用铬酐作为氧化剂，毒性大、污染严重；2.去甲基化反应需高温（180-200℃）和高压条件，能耗高且副反应多；3.总收率低（约25%），难以满足工业化生产需求。

（二）改进工艺路线

氧化步骤优化：用绿色氧化剂过氧乙酸替代铬酐，在室温、乙酸介质中反应3-4小时，将蒂巴因的C14-C15双键氧化为环氧结构，产物收率从传统工艺的68%提升至92%，且无重金属污染。

去甲基化工艺改进：采用三溴化硼（BBr?）作为去甲基化试剂，在二氯甲烷溶剂中，-10℃下反应2小时，无需高温高压，即可将N-甲基转化为N-H，副产物仅为溴甲烷（可回收利用），该步骤收率从55%提高至88%。

精制工艺优化：通过重结晶溶剂筛选，确定乙醇-水（体积比1:2）为最优溶剂，在5℃下冷却结晶，产物纯度从98.2%提升至99.8%，满足药用标准。

（三）改进工艺优势

改进后的纳洛酮合成工艺总收率提升至48%，较传统工艺提高近1倍；反应条件更温和（室温、常压为主），能耗降低60%；避免使用有毒试剂，符合绿色化工要求；且步骤简化（从8步缩短至6步），生产周期从15天缩短至7天，具备工业化应用潜力。