中国樱桃S基因型解析及S - RNase基因克隆表达机制探究.docxVIP

中国樱桃S基因型解析及S-RNase基因克隆表达机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

中国樱桃（Cerasuspseudocerasus）作为我国园艺中重要的果树之一，凭借其肉质鲜嫩多汁、味道鲜美、色泽鲜艳等特点，深受广大消费者喜爱。在乡村振兴战略深入推进的背景下，中国樱桃产业正经历结构性升级。2025年数据显示，全国樱桃种植面积达123万亩，其中西南地区凭借气候优势贡献了37%的产量。像贵州纳雍县陶营村作为玛瑙红樱桃核心产区，通过二十年的品种迭代与模式创新，形成了年产值超亿元的特色产业带，其培育的特色品种占全国同类樱桃市场份额的15%，在华东、华南地区市场占有率同比提升22%，电商渠道销售额突破4.6亿元，为区域经济发展提供了有力支撑。河南新安县凭借得天独厚的生态资源与深厚的文化底蕴，樱桃产业已形成“种植—加工—流通—文旅”全链条发展模式，种植面积突破10万亩，年产量超8000万斤，综合产值超过20亿元，带动2万余农户增收致富。

然而，中国樱桃产业发展也面临一些挑战。其花粉敏感性较强，常出现不良授粉结果，导致难以获得高质量、高产量的果实。花粉敏感性由植物的S基因决定，在花粉筛选时，S基因间的互补作用会产生花粉管阻碍因子，致使花粉管停止生长，阻碍花粉在柱头自由生长和授粉。自交不亲和性广泛存在于多数高等植物中，是植物保持遗传多样性、防止近亲繁殖的重要机制。在蔷薇科、茄科、玄参科等植物中，配子体自交不亲和（GSI）系统由具有复等位基因的S-基因座控制，S-RNase基因是雌蕊S-决定因子，在植物自交不亲和反应中发挥关键作用。

明确中国樱桃的S基因型，能够为授粉树的合理配置提供科学依据，避免因授粉不良导致的产量降低和品质下降。克隆和表达S-RNase基因，深入探究其在花粉间的互补作用和控制授粉的机制，可以为通过基因编辑技术调控S基因和S-RNase基因提供参考，进而提高中国樱桃的授粉成功率，增加果实产量和改善果实品质。本研究还将建立中国樱桃的转基因体系，为其他果树的基因改良和品种改良提供技术支撑，对推动整个果树产业的发展具有重要意义。

1.2国内外研究现状

1.2.1中国樱桃S基因型研究进展

国外对于樱桃S基因型的研究开展较早，在甜樱桃（PrunusaviumL.）S基因型鉴定方面取得了诸多成果。早期主要采用田间授粉鉴定法，依据配子体型自交不亲和，具有相同S基因型甜樱桃品种间交配不亲和的原理，通过田间品种间杂交及回交授粉结实率来确定各品种的S基因型。这种方法虽然直观、易操作，但田间授粉人工工作量大，鉴定周期长，效率低，且易受环境因素影响。

随着技术的发展，S蛋白分离鉴定法被应用于S基因型鉴定。甜樱桃自交不亲和性S基因在雌蕊花柱中表达，产物为具有核糖核酸酶活性的S糖蛋白。通过提取甜樱桃品种大蕾期花柱中可溶性蛋白质，进行等电聚焦电泳分离，再通过银染显色确定是否有S基因所表达的特异性蛋白，从而鉴定S基因型。该方法快捷、可靠，但操作程序复杂，目前应用此法鉴定甜樱桃品种S基因型的报道较少。

近年来，基于分子生物学的方法逐渐成为研究热点。例如，根据已发表的樱桃S基因序列设计引物，利用扩增片段长度的不同来鉴定樱桃品种的S基因型。有研究根据已发表的樱桃S基因序列设计了2对引物组合BFP73/74、BFP93，94，结合S1、S5基因的特异扩增引物，建立了基于PCR技术的甜樱桃品种S基因型鉴定技术，可直接在琼脂糖凝胶上直观地显示多数甜樱桃品种的S基因型。

国内对于中国樱桃S基因型的研究相对起步较晚，但也取得了一定进展。在鉴定方法上，借鉴了国外的先进技术，并结合国内樱桃品种的特点进行优化。有研究采用PCR-RFLP分析法，对中国樱桃进行基因型定性和鉴定，利用S基因特异性PCR-RFLP技术，能够快速、准确地鉴定中国樱桃的S基因型，为中国樱桃授粉品种选择及其育种亲本选配提供了重要依据。然而，目前中国樱桃S基因型的研究仍存在一些不足，如研究的品种数量有限，对于一些地方特色品种的S基因型了解甚少；不同鉴定方法之间的比较和验证不够充分，导致部分鉴定结果的准确性和可靠性有待提高。

1.2.2S-RNase基因研究进展

S-RNase基因在植物自交不亲和中起着核心作用。在配子体型自交不亲和系统中，当花粉与雌蕊的S位点单倍型相同时，雌蕊产生的S-RNase会进入花粉管内，分解花粉管中的RNA，阻止花粉管的伸长，从而导致自交不亲和；当花粉与雌蕊的S位点单倍型不同时，花粉中的S-LocusF-