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小麦抗黄矮病基因Bdv2的标记开发与突变体精准鉴定研究

一、引言

1.1研究背景

小麦作为全球最重要的粮食作物之一，是人类食物的主要来源，在保障全球粮食安全方面发挥着关键作用。然而，小麦生产面临着多种生物和非生物胁迫的挑战，其中小麦黄矮病是影响小麦产量和品质的重要病害之一。

小麦黄矮病是由大麦黄矮病毒（BarleyYellowDwarfVirus，BYDV）引起的一种病毒性病害，主要通过蚜虫传播。该病害在世界各小麦产区均有发生，严重影响小麦的生长发育，导致叶片黄化、植株矮化、分蘖减少、穗粒数降低，从而造成严重的产量损失。据统计，在病害流行年份，小麦黄矮病可导致小麦减产10%-30%，在重病区甚至可能绝收，给小麦生产带来了巨大的经济损失。在我国，小麦黄矮病曾先后于1966、1970、1978、1983、1988和1999年大面积流行，严重影响了小麦的产量和品质。

目前，对于小麦黄矮病的防治主要采用化学防治和种植抗病品种等方法。化学防治虽然在一定程度上能够控制病害的发生，但存在成本高、易污染环境以及对非靶标生物造成危害等问题。此外，由于蚜虫的远距离迁飞和病毒的变异，化学防治的效果也受到一定的限制。因此，培育和种植抗病品种是防治小麦黄矮病最经济、有效和可持续的方法。

小麦属内至今未发现对黄矮病具有良好抗性的种质资源，而其近缘种中间偃麦草对大麦黄矮病毒具有高度抗性，已至少包含三个抗黄矮病基因，分别定位在7St、7E和2Ai-2染色体上。其中，Bdv2基因被精确定位在中间偃麦草7X(St)染色体长臂端部。通过远缘杂交与生物技术，已将中间偃麦草的黄矮病抗性基因Bdv2导入普通小麦基因组，选育出抗黄矮病的小麦-中间偃麦草易位系，如HW642等。然而，由于携带Bdv2的中间偃麦草染色体片段与小麦部分同源染色体亲缘关系远，很难发生交换分离，导致难以精细定位Bdv2与分子标记之间的遗传距离，分离抗黄矮病基因的工作面临很大困难。因此，开发与Bdv2基因紧密连锁的分子标记，对于追踪和检测导入小麦背景的外源染色体，以及加速小麦抗黄矮病育种进程具有重要意义。

同时，创造不同类型的抗黄矮病基因Bdv2感病突变体，可为Bdv2基因的精细定位、分离和研究Bdv2介导的抗黄矮病机制提供坚实的材料基础。通过对突变体的研究，可以深入了解Bdv2基因的功能和作用机制，为小麦抗病育种提供理论支持。

1.2研究目的与意义

本研究旨在开发与小麦外源抗黄矮病基因Bdv2紧密连锁的分子标记，并对Bdv2基因的突变体进行鉴定和分析，为小麦抗黄矮病育种提供有效的技术手段和种质资源，推动小麦抗病育种的发展。

本研究具有重要的理论和实践意义。在理论方面，开发Bdv2基因的分子标记有助于深入研究该基因的遗传特性和作用机制，丰富小麦抗病基因的研究内容。通过对突变体的鉴定和分析，可以揭示Bdv2基因在小麦抗黄矮病过程中的关键作用，为进一步理解植物与病毒的互作机制提供理论依据。在实践方面，紧密连锁的分子标记可用于小麦抗黄矮病育种的分子标记辅助选择，提高育种效率，加快抗病品种的选育进程。同时，创制的Bdv2基因感病突变体可作为重要的种质资源，为小麦抗病育种提供新的材料，有助于培育出具有持久抗性的小麦新品种，保障小麦的安全生产，减少因黄矮病造成的产量损失，对于维护全球粮食安全和农业可持续发展具有重要意义。

1.3国内外研究现状

在小麦黄矮病抗性研究方面，国内外学者做了大量工作。国外很早就开始关注小麦黄矮病，对其病原、传播途径、发病规律等进行了深入研究。在抗病资源挖掘上，积极探寻各类小麦近缘种属的抗性基因。而国内自小麦黄矮病大面积流行以来，也高度重视相关研究。一方面通过田间自然发病鉴定和人工接种鉴定等方法，对大量小麦种质资源及品种进行抗性筛选，如利用早播诱发和堆测法对小麦种质资源和品种进行鉴定，明确了一些品种及种质资源的抗性情况。另一方面，也在不断探索新的抗病鉴定技术，如运用基因组原位杂交技术（GISH）精准甄别抗黄矮小麦，直观呈现抗病与感病小麦在基因组层面的差异特征，为抗病小麦选育、基因定位及功能解析提供关键技术支撑与理论依据。

针对Bdv2基因的研究，国内外均聚焦于其定位与利用。国外通过染色体工程技术将携带Bdv2基因的中间偃麦草染色体片段导入小麦，创建了一系列小麦-中间偃麦草易位系，并对这些易位系进行细胞学和分子生物学鉴定。国内在这方面也取得显著成果，如将Bdv2基因导入普通小麦基因组，选育出抗黄矮病的小麦-中间偃麦草易位系HW642等。为了检测追踪导入的外源染色体，基于小麦第七群已定位EST，开发外源染色体特异的EST-PCR标记，筛选出与Bdv2基因相连锁的