土壤中分解尿素的细菌的分离与计数-备战2022年高考生物一轮复习课件.pptVIP

纯化大肠杆菌;菌种分离后保存;课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;一、课题背景;3.常见的分解尿素的微生物;1.实例：;要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；

方法：

⑴抑制大多数微生物不能生长

⑵造成有利于该菌生长的环境

结果：通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。;15.0g;〖思考2〗该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是_____________________________________。;培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基（选择培养基）就能够选择出分解尿素的微生物。;（二）统计菌落数目;1.显微镜直接计数;血球计数板;2.间接计数法（活菌计数法）

⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。

⑵常用方法：稀释涂布平板法;注意事项

①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。

②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。

③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

④恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。;如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？;第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。

第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。;计算公式：;（1）为提高果酒的品质，需先获得纯净的酵母菌菌种。吸取1mL酵母菌样液，在105稀释倍数下统计各平板上生长的平均菌落数为32，涂布时所用稀释液体积为0.1mL，则每升样液中的菌株数=_________个。;(2)若将1mL菌悬液梯度稀释106倍，再取0.1mL接种到细菌固体培???基上，分别形成了260、280、270个菌落，则原菌悬液中每毫升有细菌_________个;(3)将1mL该菌溶液稀释100倍，在3个平板上分别涂布0.05mL稀释液适当培养后，3个平板上的菌落数分别为99、100、101,据此可得出每升溶液中该菌活菌数为_______________。;伊红—美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因其代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈黑色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。;设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。;小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。;菌落计数;实验的具体操作

㈠.土壤取样

从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。

◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

;◆应在火焰旁称取土壤10g。

◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行;（三）微生物的培养与观察并计数;当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。;微生物的培养与观察;关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。;三、操作提示;（六）鉴定：筛选后必鉴定

鉴别培养基：加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存

1.酚红培养基：

鉴定分解尿素的细菌。

原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性

2.伊红—美蓝培养基：

鉴定大肠杆菌。

原理：代谢产物与伊红—美蓝结合→菌落呈黑色并带有金属光泽。;本课题知识小结:;课后练习

;4．筛选出抗盐细菌是培育抗盐农作物的重要环节。回答下列相关问题：

(1)分离抗盐细菌的土壤应来自_________。

(2)培育微生物常用的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，该培养基为微生物提供_____

________________________________。

(3)若要对获取的抗盐细菌样液进行计数，常采用固体培养基，统计时，通过统计培养基中菌落数即可间接计算出样液中细菌数的原因是____________________________