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PRRSV-ORF5基因与结核杆菌HSP70基因融合表达的机制与应用研究

一、引言

1.1研究背景与意义

猪繁殖与呼吸综合征（PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirus，PRRSV）引起的一种具有高度传染性的疾病，对全球养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV主要侵害猪的呼吸系统和生殖系统，导致母猪繁殖障碍，如流产、早产、死胎等，以及仔猪和育肥猪的呼吸道症状，严重影响猪的生长性能和免疫功能，增加了猪感染其他病原体的风险。据统计，仅在美国，PRRS每年给养猪业带来的经济损失就高达6亿美元以上，在我国，养猪业也是农业经济的重要支柱之一，PRRS的流行同样给养殖户带来了沉重的打击，因此，对PRRSV的研究具有极其重要的意义。

PRRSV-ORF5基因编码了PRRSV病毒的外壳蛋白，该蛋白是PRRSV病毒识别和感染宿主免疫系统的重要组成部分，在病毒的感染过程中发挥着关键作用。对PRRSV-ORF5基因的深入研究，有助于揭示PRRSV的致病机制，为开发有效的防控措施提供理论基础。

另一方面，结核杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）是引起结核病（Tuberculosis，TB）的病原菌，结核病是一种严重威胁人类健康的慢性传染病。据世界卫生组织（WHO）报告，全球约有1/4的人口感染结核杆菌，每年新增结核病患者约1000万例，死亡人数约150万例。结核杆菌热休克蛋白70（HeatShockProtein70，HSP70）是一种在细胞内具有重要生物学功能的蛋白质，它参与了细胞的多种生理过程，如蛋白质折叠、转运、降解等，在结核杆菌的生存、繁殖和致病过程中发挥着重要作用。此外，HSP70还具有免疫调节功能，能够增强机体的免疫应答，被广泛应用于生物制药工业中，作为疫苗佐剂或免疫增强剂。

基因融合表达技术是指将两个或多个不同基因的编码区首尾相连，置于同一套调控序列控制之下，构成嵌合基因并使其表达出融合蛋白的技术。通过基因融合表达，可以将不同蛋白质的功能特性整合到一个融合蛋白中，赋予其新的生物学活性和功能。将PRRSV-ORF5基因与结核杆菌HSP70基因进行融合表达，有可能获得具有独特免疫原性和免疫调节功能的融合蛋白，为PRRS和结核病的防控提供新的策略和方法。一方面，融合蛋白中的PRRSV-ORF5部分可以诱导机体产生针对PRRSV的特异性免疫应答，提供对PRRS的免疫保护；另一方面，HSP70部分可以增强机体的免疫反应，提高免疫效果，同时还可能具有佐剂作用，增强融合蛋白的免疫原性。此外，这种融合表达的研究还可以为基因工程疫苗的研发提供新的思路和方法，具有重要的科学意义和应用价值。

1.2国内外研究现状

在PRRSV-ORF5基因的研究方面，国内外学者已经取得了丰富的成果。研究发现，PRRSV-ORF5基因存在广泛的变异，不同地区、不同时间分离的毒株之间ORF5基因序列存在差异，这些变异可能导致病毒的抗原性、致病性和免疫原性发生改变，给PRRS的诊断、防控和疫苗研发带来了挑战。国内学者对重庆地区流行的PRRSV的ORF5基因进行变异分析，发现该地区流行的PRRSV与国内2006-2007年间的分离株亲缘关系较近，在ORF5的2个线性抗原表位中存在独特的变异。国外也有研究表明，PRRSV-ORF5基因的变异与病毒的毒力和传播能力密切相关。此外，基于PRRSV-ORF5基因的基因工程疫苗研究也取得了一定进展，包括亚单位疫苗、核酸疫苗等，但目前仍存在免疫效果不稳定、保护率不高等问题。

对于结核杆菌HSP70基因，国内外也开展了大量研究。研究表明，HSP70在结核杆菌的生长、存活和致病过程中发挥着重要作用，它可以帮助结核杆菌适应宿主细胞内的环境压力，逃避宿主免疫系统的攻击。在免疫调节方面，HSP70能够激活免疫细胞，促进细胞因子的分泌，增强机体的免疫应答。在基因克隆和表达方面，已经成功地从结核杆菌中克隆出HSP70基因，并在大肠杆菌、酵母等表达系统中实现了表达。此外，HSP70作为疫苗佐剂或免疫增强剂的研究也取得了一定的成果，部分研究表明，将HSP70与结核杆菌的其他抗原联合使用，可以提高疫苗的免疫效果。

关于PRRSV-ORF5基因与结核杆菌HSP70基因的融合表达研究，目前还处于探索阶段。国内外一些学者尝试利用重组DNA技术构建融合表达载体，并在不同细胞系统中对融合蛋白