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微生物学主讲教师——微生物教学团队

实训平板菌落计数法

目录3CONTENT01实训目的02实训原理03材料和用具04操作步骤0506注意事项思考题

知识目标：掌握平板菌落计数法。技能目标：能够进行平板接种及计数。思政目标：树立科学严谨的职业态度。技能重点：平板菌落计数法的接种。技能难点：菌悬液浓度梯度稀释。

01实训目的及原理

一、实训目的及原理学习平板菌落计数的基本原理和方法。平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming?units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。

02材料和用具

二、材料和用具一、培养基牛肉膏蛋白胨培养基二、菌种大肠杆菌菌悬液三、仪器器皿无菌吸管，无菌平皿，盛有9.0mL无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。

03操作步骤

三、操作步骤01编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。另取6支盛有9.0mL无菌水的试管，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。153×103=1.53×105菌落数/mL

三、操作步骤用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌悬液(待测样品)，放至10-1的试管中，此即为10倍稀释。用吸管吸取10-1菌液lmL放至10-2试管中，此即为100倍稀释。……其余依次类推。02稀释153×103=1.53×105菌落数/mL

三、操作步骤用移液器分别吸取10-4、10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL，对号放入编好号的无菌平皿中。03取样153×103=1.53×105菌落数/mL

三、操作步骤尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入融化后冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基约15mL/平皿，置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。待培养基凝固后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养。04倒平板153×103=1.53×105菌落数/mL

三、操作步骤培养24h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数，一般选择每个平板上长有30～300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。05计数153×103=1.53×105菌落数/mL

05注意事项

注意事项接种时规范使用酒精灯，注意安全。接种过程、环境、器皿要求无菌。0102微量移液器使用时要规范。操作结束后养成清场的职业习惯。0304

06思考题

思考题当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里?为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板?

感谢聆听再见！