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微生物学主讲教师——微生物教学团队

目录2CONTENT药物体外抗菌试验一药物体外杀菌技术二体外抗菌测定技术三联合抗菌技术

教学目标知识目标：1.掌握体外抗菌基础知识；2.理解联合抗菌技术效果，了解体外杀菌知识。能力目标：能够按照药典规范操作管蝶法；素质目标：培养学生科学严谨的职业态度；重点：体外抗菌技术操作难点：理解联合抗菌技术

一、药物体外抗菌试验（一）影响抗菌试验的因素1.试验菌：标准菌株或临床分离菌株2.培养基：严格配制3.供试药物：精确配制4.对照试验：全面

（二）药物的体外抗菌试验技术1.稀释法（1）液体稀释法——新药抗菌效力测定①用液体培养基稀释药物，使成系列递减浓度，如：100→50→25→12.5→6.25(μg／ml)②加入一定量的试验菌，培养24～48h，观察试管内混浊情况，记录抑制细菌生长的最低浓度(MIC)③未长菌的培养液移种新鲜琼脂培养基上，如重新长菌只具抑菌作用，如无菌生长，则具有杀菌作用，记录最低杀菌浓度（MBC）一、药物体外抗菌试验

1.稀释法（2）琼脂稀释法①平板法——中药制剂或新药的药效学试验将系列浓度的药物混入琼脂平板，然后在平板上划线接种试验菌。可在一组平板上同时测定几种试验菌的MIC。②斜面法：将不同浓度的药物混入培养基中制成斜面，在斜面上接种一定量试验菌，然后观察斜面是否有菌生长，判断MIC值。一、药物体外抗菌试验（二）药物的体外抗菌试验技术

一、药物体外抗菌试验2.琼脂扩散法琼脂扩散法是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，并在一定浓度范围内抑制细菌生长的原理。根据抑菌圈直径或抑菌范围大小来判断抗菌作用的强弱（二）药物的体外抗菌试验技术（1）滤纸片法涂布平板放含药纸片量抑菌圈

一、药物体外抗菌试验常用于测试一种药物对几种细菌的抗菌作用。方法：在无菌平板上挖沟，沟内加入药液，然后在沟两旁接种几种试验菌，经培养后观察细菌的生长情况，根据沟和细菌间抑菌距离的长短，来判断该药物对这些细菌的抗菌能力。（二）药物的体外抗菌试验技术（2）挖沟法

一、药物体外抗菌试验（3）管蝶法不锈钢小管内径为6.0mm±0,1mm,高为10.0mm±0.1mm,外径为7.8mm±0.1mm

二、药物体外杀菌技术按液体培养基稀释法的操作方法测出药物的MIC，将未长菌的各管培养液分别移种到无菌平板上，培养后凡平板上无菌生长的药物最低浓度为最小致死浓度(MLC)，如果是细菌可称为最小杀菌浓度(MBC)。（一）最小致死浓度的测定

二、药物体外杀菌技术活菌计数一般是将定量的药物与试验菌作用后的混合液稀释后，混入琼脂培养基，制成平板，培养后计数平板上形成的菌落数，即平板菌落计数法。（二）活菌计数法（三）化学消毒剂的效力测定消毒剂效力的测定常用酚系数法，是以酚为标准，将待测的化学消毒剂与酚的杀菌效力相比较，得到杀菌效力的比值。

三、联合抗菌技术在含菌平板上垂直放置两条浸有不同药液的滤纸条，培养后观察两药形成的抑菌区的图形来判断两药联合应用时是无关、协同或拮抗作用。（一）纸条试验出现4种结果：①无关：两种药物联合作用的活性等于其单独活性；②拮抗：两种药物联合作用显著低于单独抗菌活性；③累加：两种药物联合作用时的活性等于两种单独抗菌活性之和；④协同：两种药物联合作用显著大于其单独作用的总和。协同拮抗无关

三、联合抗菌技术将琼脂培养基倒入平皿，平皿斜放凝固后制成斜面培养基。将平皿放平加入含抗菌药物的琼脂培养基，这样在制成的双层琼脂平板中含有梯度浓度的抗菌药物。要求其最小抑菌浓度的位置约处于平板的一半。然后将试验菌液沿药物浓度递减的方向置于平板表面，培养后观察形成的抑菌区的图形以判断两种药物之间的相互作用。（二）梯度平板纸条试验

三、联合抗菌技术棋盘稀释法是常用的定量方法，首先分别测定拟联合的抗菌药物对检测菌的MIC。药物最高浓度为MIC的2倍，对倍稀释。两种药物的稀释分别在方阵的纵列和横列进行，这样在每管（孔）中可得到不同浓度组合的两种药物混合液。接种菌量一定，35℃孵育18h后观察结果。计算部分抑菌浓度（FIC）指数。FIC指数：0.5为协同作用；0.5～1为相加作用；1～2为无关作用；＞2为拮抗作用。（三）棋盘格法

三、联合抗菌技术（三）棋盘格法药物及浓度青霉素G(IU／m1)链霉素单药对照4210.50.25链霉素（μg／ml）64------32