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间氨基苯硼酸介导的蛋白质分子印迹：原理、制备与QCM表征技术探究

一、绪论

1.1分子印迹技术概述

1.1.1发展历程

分子印迹技术的发展历程可追溯至20世纪，其起源与抗体-抗原专一性的研究密切相关。1940年，Pauling提出以抗原为模板合成抗体的假说，这为分子印迹技术的发展奠定了理论基础，可视为分子印迹技术的萌芽阶段。此时，虽然只是理论设想，但为后续研究指明了方向。

到了20世纪70年代，分子印迹技术进入初步探索阶段。1972年，Wulff采用“共价印迹法”成功制备出分子印迹有机聚合物材料，这是分子印迹技术发展的重要里程碑，标志着分子印迹技术从理论走向实践，开启了分子印迹聚合物材料制备的先河。然而，共价印迹法存在功能单体选择有限、模板难以除去等缺点。

1993年，瑞典学者Mosbach课题组利用自组装方法成功制备了茶多酚的分子印迹聚合物，并将成果发表在《Nature》杂志上。这一突破标志着非共价印迹方法逐渐走向成熟。非共价键法以其操作简便、适用范围广等优势，克服了共价键法的部分弊端，使得分子印迹技术得到更广泛的关注和研究，推动了分子印迹技术在更多领域的应用探索。

1995年，Whitcombe课题组将“共价印迹”和“非共价印迹”巧妙结合，制备了“半共价”分子印迹聚合物材料，为分子印迹技术提供了更多的可能性，进一步丰富了分子印迹聚合物的制备策略，满足了不同应用场景对分子印迹材料的需求。

进入21世纪，随着微纳技术的兴起，分子印迹技术进入微纳技术应用阶段。Hjrten等采用包埋法制备了低交联度的凝胶，对多种生物大分子进行了印迹；表面印迹法也得到广泛应用。这些新技术的应用，使分子印迹材料在生物医学、环境检测等领域展现出巨大潜力，提高了分子印迹材料对生物大分子的识别和应用性能，为解决生物医学和环境领域的复杂问题提供了新的手段。

1.1.2基本原理

分子印迹技术的基本原理是模拟生物体内的识别过程，利用模板分子与功能单体之间的相互作用，通过交联剂聚合形成具有特定空间结构的聚合物网络，从而实现对目标分子的特异性识别。

在制备分子印迹聚合物（MIP）时，首先在一定溶剂（致孔剂）中，模板分子与功能单体依靠官能团之间的共价或非共价作用形成主客体配合物。其中，非共价作用包括静电引力（离子交换）、氢键、金属鳌合、电荷转移、疏水作用以及范德华力等，这些作用使得模板分子与功能单体能够有序结合。例如，在对某些含有极性基团的模板分子进行印迹时，功能单体上的极性基团与模板分子的极性基团之间通过氢键相互作用，形成稳定的主客体配合物。

随后，加入交联剂，并通过引发剂引发进行光或热聚合。在聚合过程中，主客体配合物与交联剂通过自由基共聚合，在模板分子周围形成高度交联的刚性聚合物。这种聚合物网络将模板分子固定其中，形成了与模板分子空间构型相匹配的三维结构。

最后，将聚合物中的印迹分子洗脱或解离出来。经过这一步骤，在聚合物中便留下了与模板分子大小和形状相匹配的立体孔穴，同时孔穴中包含了精确排列的与模板分子官能团互补的由功能单体提供的功能基团。当目标分子（与模板分子相同或结构相似）再次进入该聚合物体系时，这些孔穴能够特异性地识别并结合目标分子，就像锁与钥匙的关系一样，实现对目标分子的选择性分离和检测。

1.1.3技术特点

分子印迹技术具有构象预定性，能够根据不同的目的，通过选择合适的模板分子和功能单体，设计并制备出具有特定识别位点和空间结构的MIPs，以满足各种不同的分离、检测和催化等需求。比如在药物分析中，可针对特定药物分子制备MIP，实现对该药物的特异性识别和分离。

MIPs是按照模板分子量身定制的，对印迹分子具有高度的专属性识别能力，能够区分结构相似的分子。在复杂样品的分析中，MIPs可以准确地识别目标分子，减少干扰物质的影响，提高分析的准确性和可靠性。在生物样品中分离特定蛋白质时，MIPs能够从众多蛋白质中精准识别并结合目标蛋白质。

分子印迹技术制备的MIPs由化学合成方法得到，具有良好的热稳定性、化学稳定性和机械稳定性，能在较宽的pH值、温度和有机溶剂等环境条件下使用，具有天然分子识别系统所不具备的抗恶劣环境的能力，表现出高度的稳定性和长的使用寿命，可重复使用多次，降低了使用成本。在环境监测中，MIPs制成的传感器可在不同的环境条件下长期稳定工作，实现对污染物的持续监测。

1.2蛋白质分子印迹技术

1.2.1面临挑战

蛋白质分子印迹技术在发展过程中面临诸多挑战。蛋白质是生物大分子，其结构复杂且在聚合条件下容易发生变性，导致其天然构象改变，从而影响分子印迹聚合物对其特异性识别位点的形成。在高温或高浓度的单体、交联剂等聚合条件下，蛋白质的三维结构可能会发生扭曲，