2020年高三生物一轮复习备战2021-必备知识梳理-第28讲-基因工程.docxVIP

备战2021高三生物一轮复习必备知识梳理

第28讲基因工程

考点一基因工程的根本工具

1.限制性核酸内切酶(限制酶)

(1)来源：主要从原核生物中别离纯化而来。

(2)作用：识别双链DNA分子中某种特定的核苷酸序列并切开每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。

(3)结果：产生黏性末端或平末端。

如下列图所示，EcoRⅠ限制酶识别的碱基序列是GAATTC，切割位点在G和A之间；SmaⅠ限制酶识别的碱基序列是CCCGGG，切割位点在G和C之间；说明限制酶具有专一性。

连接酶

(1)作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成新的DNA分子。

(2)类型

常用类型

E·coliDNA连接酶

T4DNA连接酶

来源

大肠杆菌

T4噬菌体

功能

只“缝合〞黏性末端

“缝合〞黏性末端和平末端

结果

恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键

3.载体

(1)常用载体——质粒化学本质

(2)其他载体：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。

(3)载体的作用：携带外源DNA片段进入受体细胞。

限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶等相关酶的分析比拟

名称

作用部位

作用底物

形成产物

限制酶

磷酸二酯键

DNA分子

带黏性末端或平末端的DNA片段

DNA连接酶

磷酸二酯键

DNA片段

重组DNA分子

DNA聚合酶

磷酸二酯键

脱氧核苷酸

子代DNA分子

热稳定DNA聚合酶

磷酸二酯键

脱氧核苷酸

子代DNA分子

DNA(水解)酶

磷酸二酯键

DNA分子

游离的脱氧核苷酸

解旋酶

碱基对间的氢键

DNA分子

脱氧核苷酸单链

RNA聚合酶

磷酸二酯键

核糖核苷酸

单链RNA分子

考点二基因工程操作步骤

1.目的基因的获取

(1)目的基因：主要指编码蛋白质的基因，也可以是一些具调控作用的因子。

(2)获取方法从

2.基因表达载体的构建——基因工程的核心

(1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。

(2)基因表达载体的组成

(3)构建过程

3.将目的基因导入受体细胞

生物种类

植物细胞

动物细胞

微生物细胞

常用方法

农杆菌转化法

显微注射法

感受态细胞转化法

受体细胞

体细胞或受精卵

受精卵

原核细胞

转化过程

将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→导入农杆菌→用农杆菌侵染植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达

将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物

Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子

4.目的基因的检测与鉴定

基因工程操作过程中的5个易错点

1.目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。

2.基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象：第一步存在人工合成法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象，第四步存在分子杂交检测目的基因，都存在碱基互补配对现象。

3.农杆菌转化法原理：农杆菌易感染植物细胞(双子叶植物和裸子植物)，其Ti质粒上的T-DNA可转移并整合到受体细胞染色体的DNA上。

4.标记基因的种类和作用：常见的标记基因有抗生素抗性基因、发光基因(表达产物为带颜色的物质)等。标记基因的作用是筛选、检测目的基因是否导入受体细胞。

5.受体细胞的选择：受体细胞常用植物受精卵或体细胞(经组织培养)、动物受精卵(一般不用体细胞)、微生物(大肠杆菌、酵母菌)等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰岛素(需内质网、高尔基体的加工、分泌)那么必须用真核生物，如酵母菌；一般不用支原体，原因是它营寄生生活；一定不能用哺乳动物成熟的红细胞，原因是它无细胞核，也没有核糖体等细胞器，不能合成蛋白质。

考点三基因工程的应用于蛋白质工程

1.基因工程的应用

(1)动物基因工程：用于提高动物生长速度从而提高产品产量；用于改善畜产品品质；用转基因动物生产药物；用转基因动物作器官移植的供体等。

(2)植物基因工程：培育抗虫转基因植物(如抗虫棉)、抗病转基因植物(如转基因烟草)和抗逆转基因植物(如抗寒番茄)；利用转基因改进植物的品质(如新花色矮牵牛)。

(3)比拟基因治疗与基因诊断

原理

操作过程

进展

基因

治疗

基因表达

将正常基因导入有基因缺陷的细胞中，以表达出正常性状来治疗疾病

临床实验

基因

诊断

碱基互补配对

制作特定的DNA探针与病人样品DNA混合，分析杂交带情况

临床应用

2.蛋白质工程

(1)概念理解

a.根底：蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系。

b.操作：基因修饰或基因合成。

c.结果：改造了现有蛋白质或制造出新的蛋白质。

d.目的：根据人们对蛋白质功能的特定需求，对蛋白质结构进行分子设计。

(2)操