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PCR抑制剂和增强剂

PCR抑制剂SDS苯酚乙醇异丙醇乙酸钠氯化钠EDTA血红素（heme）hemin（氯高铁血红素）tannicacids（丹宁酸）肝素尿素二甲苯胺溴芬兰腐殖质植物多糖聚苯乙烯、聚丙烯铁离子bilirubin（胆红素）胆酸盐

抑制剂来源抑制剂来源胆酸盐粪便复杂多糖粪便，植物材料胶原质组织血红素（heme）血液腐植酸土壤，植物材料，自然界水黑色素头发，皮肤尿素尿血色素hemoglobin血液靛青染料粗斜纹棉布聚苯乙烯，聚丙烯紫外线照射塑料管蛋白酶牛奶钙离子牛奶，骨头

抑制剂的作用浓度SDS离子去污剂，蛋白变性，0.01%即可完全抑制PCR反应，0.005%可显著降低产量苯酚蛋白变性，0.5%即可完全抑制PCR反应，0.2%可显著降低产量乙醇大于1%的浓度可抑制PCR反应，但在某些系统中可增加产量。异丙醇抑制作用比乙醇稍强乙酸钠大于5mM时抑制PCR反应氯化钠大于25mM时抑制PCR反应EDTA0.5mM可使PCR产物减少，1mM完全没有PCR产物。血色素1mg/ml肝素0.15I.U./ml尿素20mM（相当于10μlPCR体系中含0.6μl尿液）氯高铁血红素0.1ng/μl丹宁酸0.1ng/μl

例2：间接产生的抑制剂YoshiiT等人1992年，用单根头发提取DNA扩增线粒体DNA一段333bp的非编码区。所有实验均截取5cm长的毛干后研究表明染色剂中的过氧化氢可以使不溶于水的黑色素变成水溶性的。头发种类截取毛干区域扩增成功率自然黑发离根部11cm内100%离根部11cm外部分成功离根部16cm外几乎不成功白头发离根部31cm外可成功染成深咖啡色的黑头发完全失败染成深咖啡色的白头发可成功扩增

PCR增强剂PCR增强剂可以增加所需PCR产物的产量或减少非特异性产物。有许多的PCR增强剂，原理各不相同，这些试剂不可能对所有的PCR反应都起作用。根据其作用和原理，可以大致分为三类：1.用于扩增高GC含量或形成复杂二级结构的模板（共溶剂）2.用于保护DNA聚合酶的活性和稳定性3.用于优化引物和模板的结合

1.用于扩增高GC含量或形成复杂二级结构的模板的增强剂甜菜碱（betaine），二甲基亚枫（DMSO）和甲酰胺（formamide），甘油，适合于扩增高GC含量和形成复杂二级结构的模板。甜菜碱1M、DMSO1-10％（5%？）、甲酰胺1-5％、甘油1％-10％对某些反应可以显著提高产量，但过量的这些试剂会抑制PCR反应。

2.用于保护聚合酶的活性和稳定性的增强剂有的反应中，0.1mg/ml的BSA、0.1-10％的明胶（gelatin）或非离子型的去污剂，可以解决一些扩增失败的问题，这类试剂可以增加聚合酶的稳定性，减少试剂在管壁上的吸附。BSA可以抵抗血色素、黑色素等的抑制作用.非离子去污剂，例如Tween?-20,NP-40和Triton?X-100等，可以抵抗痕量的强离子去污剂的抑制作用，比如0.01%的SDS。

3.用于优化引物和模板的结合

铵离子的添加，可以减少引物和模板的错配，提高反应的特异性，可以让PCR对反应条件的要求更低，所以很多PCR试剂都包含了10-20mM的硫酸铵。氯化四甲胺tetramethylammoniumchloride（15-100mM）也起到类似的作用

例：ReliefofAmplificationInhibitioninPCRwithBovineSerumAlbuminorT4Gene32Protein已知抑制剂：EDTA,SDS,TritonX-100，hemin（氯高铁血红素），bilirubin（胆红素），sodiumglycocholate(甘胆酸钠)，sodiumcholateplusdeoxycholate（脱氧胆酸钠），sodiumtaurocholate,（牛黄胆酸钠），tannicacids（丹宁酸），humicacid(腐植酸)，氯化铁，氯化钠，采自泥炭和Suwannee河的腐植酸和fulvicacid(棕黄酸)

不添加任何增强剂

PCR体系中加入400ng/μlBSA

加和不加增强剂的比较

结果1抑制剂不加增强剂时的抑制水平加入增强剂后的抑制水平增强剂效果EDTA1mM1mM无效FeCl31mM10μM100倍bilirubin（胆红素）10μg/μl100μg/μl10倍，不明显Humicacid，Hemin，tannicacid0.1ng/μl10ng/μl100倍fulvicacid1ng/μl100ng/μl100倍

结果21.BSA和gp32都不能减少最小浓度的下列抑制剂的抑制作用：0.1M氯化钠，0.1MSDS，10