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微生物学实验技术;第一章普通光学显微镜的使用;油镜：放大倍数最大，可达100x，使用时需要在载玻片和镜头之间滴加镜油。

1）增加照明亮度

2）增加显微镜的分辨率

;;二、使用前准备：

1）光源调节自带光源或自然光源

2）目镜调节双筒显微镜的目镜间距可以适当调节，左目镜上一般还配有屈光度调节环，可以适应眼距不同或双眼视力有差异的观察者。

3）聚光器调节光圈、光源亮度、聚光器高度;一般情况下，应遵守从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序，因为低倍数物镜视野相对大，易发现目标及确定检查的位置。

注意：切不可将高倍镜转动经过加有镜油的区域。

按照说明书对显微镜进行清洁保养。

;第二章细菌制片;二、干燥

自然干燥、用电吹风干燥。

三、固定

涂菌面朝上，通过火焰2-3次。

四、镜检

;;第三章细菌的革兰氏染色;革兰氏染色

1.制片

取活跃生长期菌种按常规方法涂片(不宜过厚)、干燥和固定。

2.初染

滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min后倾去染液，水洗至流出水无色。;3.媒染

先用碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min，倾去碘液，水洗至流出水无色。

4.脱色

将玻片上残留水用吸水纸吸去，在白色背景下用滴管加95%乙醇脱色(一般20-30s)，当流出液无色时立即用水洗去乙醇。;5.复染

将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min，水洗，吸去残水晾干。

6.镜检

油镜观察。;;革兰氏阴性菌：

细胞壁肽聚糖层较薄、交联度低，含有较多易被乙醇溶解的类脂质，所以用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。

;革兰氏阳性菌：

细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫色。

;第四章真菌形态观察;1、美蓝染液水浸片法

滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。

用镊??取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。;将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态，并根据细胞颜色区分死活细胞。

染色30mm后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变化。

;美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞胞内还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。;2、水一碘液浸片法

将革兰氏染色用碘液用水稀释4倍后，滴加一滴于载玻片中央，无菌操作取少许菌体置于染液中混匀，盖上盖玻片后镜检。;二、霉菌形态观察