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血液网织红细胞检测标准操作规程

前言

网织红细胞（Reticulocyte,RET）是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞之间的过渡阶段细胞，其数量和成熟度的变化直接反映了骨髓的造血功能状态。准确、及时的网织红细胞检测对于贫血的诊断、鉴别诊断、疗效观察以及骨髓造血功能评估具有重要的临床意义。为规范本实验室网织红细胞检测的操作流程，确保检测结果的准确性、精密度和可靠性，特制定本标准操作规程（SOP）。本规程适用于本实验室所有从事网织红细胞检测的技术人员，并应根据技术发展和实验室条件变化进行定期评审和修订。

1.检验目的

定量检测外周血中网织红细胞的数量（百分比及绝对值），并根据其成熟度相关参数（如网织红细胞血红蛋白含量、未成熟网织红细胞比率等，依仪器型号而定），辅助评估骨髓红系造血功能。

2.原理

网织红细胞胞质内残存的核糖核酸（RNA）等嗜碱性物质，在活体染色（如煌焦油蓝、新亚甲蓝）条件下，可被氧化还原染料着色，形成蓝色或蓝绿色的网状、点状或丝团状结构。通过显微镜直接计数或自动化血液分析仪的流式细胞术原理，对这些被染色的细胞进行识别和计数，从而得出网织红细胞在红细胞总数中所占的百分比，并结合红细胞计数计算出网织红细胞绝对值。自动化仪器通常结合荧光染色和光散射技术，能更精确地区分网织红细胞的不同成熟阶段，并提供更多相关参数。

3.标本采集与处理

3.1标本类型

静脉血，采用乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K?）抗凝真空管采集。

3.2采集要求

采集人员需严格遵守无菌操作规范，静脉穿刺顺利，避免溶血、凝固及过度稀释。采集后轻轻颠倒混匀数次，确保抗凝剂与血液充分混合。

3.3标本运输与保存

标本采集后应尽快送检，室温（18-25℃）下可稳定数小时。若不能及时检测，可置于2-8℃冰箱冷藏，但保存时间不宜超过规定时限（通常不超过24小时），检测前需恢复至室温并充分混匀。冷冻标本严禁用于网织红细胞检测。

3.4标本验收

实验室接收标本时，需检查标本标识是否清晰完整、抗凝是否恰当（有无凝块）、有无溶血、血量是否充足。不合格标本应拒收，并及时与临床沟通重新采集。

4.试剂与仪器

4.1试剂

4.1.1染色液：如煌焦油蓝染液、新亚甲蓝染液等，用于手工法。应使用经国家药品监督管理局批准、在有效期内的商品化试剂，并按试剂说明书要求储存和使用。

4.1.2稀释液：根据仪器要求选择配套或指定的稀释液。

4.1.3质控品：用于仪器日常质量控制，包括高、中、低不同水平。

4.2仪器

4.2.1手工法：显微镜（配备油镜）、血细胞计数板（如改良牛鲍计数板）。

4.2.2仪器法：全自动血液分析仪（具备网织红细胞检测功能），需定期进行维护保养和校准。

4.3其他耗材

微量吸管、洁净试管、载玻片、盖玻片等，应符合相关质量要求。

5.操作步骤

5.1手工计数法（显微镜法）

5.1.1染色：取洁净小试管一支，加入适量染色液（如煌焦油蓝），再加入等量或按比例加入抗凝全血，立即混匀。室温下染色适当时间（通常10-15分钟，具体参照试剂说明）。

5.1.2制涂片：染色完成后，取少量染色血液，按常规方法制备血涂片，自然干燥或用冷风加速干燥，注意涂片应厚薄适宜、分布均匀。

5.1.3镜检：先在低倍镜下观察涂片质量及细胞分布情况，然后转换油镜，选择细胞分布均匀、无重叠、染色良好的区域，计数至少1000个红细胞中所含的网织红细胞数。

5.1.4计算：网织红细胞百分比（%）=（计数的网织红细胞数/计数的红细胞总数）×100%。

5.2仪器法（以某型号全自动血液分析仪为例，具体操作参照仪器说明书）

5.2.1开机：按仪器操作规程开启仪器，进行预热、自检。

5.2.2质控：每日开机后或每批标本检测前，运行质控品，确保质控结果在控。

5.2.3标本准备：充分混匀待检抗凝全血标本。

5.2.4上机检测：根据仪器提示，选择网织红细胞检测模式，将标本管正确放置于仪器样品架上，仪器自动完成取样、稀释、染色、检测和结果分析。

5.2.5结果审核：仪器检测完成后，技术人员应对结果进行审核，观察散点图/直方图是否正常，有无异常报警信息。

6.结果计算与报告

6.1结果计算

6.1.1网织红细胞百分比（RET%）：仪器或手工计数得出。

6.1.2网织红细胞绝对值（RET#）：RET#（×10?/L）=RET%×RBC计数（×1012/L）×103。

6.1.3其他参数：如网织红细胞血红蛋白含量（RET-He）、未成熟网织红细胞比率（IRF）等，由仪器直接给出。

6.2结果报告

6.2.1报告内容：至少包括RET%和RET#，根据临床需求和仪器性能可增加其他相关参数。

6.2.2单位：RET%以百分比（%）表示，RET#以×10?