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兔肌肉提取物检验标准操作程序

文件目录：

TOC\o1-1\h\z\u228821.目的 2

135222.适用范围 2

21393.职责 2

234614.定义 2

147935.主要内容 2

46776.派生记录 5

325807.相关文件 5

100838.附件 6

54219.修订历史 6

1.目的

为规范和指导兔肌肉提取物的检验操作步骤及技术要求。确保实验结果的准确性，特制订本程序。

2.适用范围

本程序适用于兔肌肉提取物的检验。

3.职责

质量控制室人员：负责该程序的起草

质量控制室主任：负责该程序的审核

质量总监：负责该程序的批准

4.定义

不适用

5.主要内容

5.1引用标准

《兔肌肉提取物内控质量标准》

5.2品名兔肌肉提取物

5.3性状本品为微黄色至黄色的溶液。

5.4鉴别

5.4.1取本品适量加水稀释制成每1ml约含多肽3.2mg的供试品溶液。取供试品溶液1ml，加茚三酮试液数滴，加热，应显紫色。

5.4.2取本品适量加水稀释制成每1ml约含多肽3.2mg的供试品溶液。取供试品溶液2ml，加40%氢氧化钠溶液0.5ml，摇匀，再加1%硫酸铜溶液1ml，溶液应显蓝紫色。

5.5检查

5.5.1pH值

取本品10ml，参见《pH值测定法标准操作规程》，依法测定，pH值应为6.5～7.5。

5.5.2细菌内毒素

取本品适量，加细菌内毒素检查用水稀释制成每ml约含多肽3.2mg的供试品溶液，参见《细菌内毒素检查法标准操作规程》，依法测定，每1ml中含细菌内毒素的量应小于3EU。

5.6含量测定

5.6.1多肽

操作方法对照品溶液的制备：取牛血清白蛋白对照品，加适量量瓶中，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。

取本品1.0ml至150ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制成每1ml中约含多肽0.15mg的溶液，作为供试品溶液，参见福林酚测定法（见附件一）及《紫外-可见分光光度法标准操作规程》，依法测定。

本品每1ml含多肽应不少于6.4mg。

计算公式：C=（KA+K0）×R/V

式中：C：供试品浓度；

A：为样品的吸光度；

R：稀释倍数；

K、K0：回归方程常数；

V：取样量

允许误差参见《检验工作管理程序》

5.6.2游离氨基酸

操作方法取本品2.0ml至10ml量瓶中，加水稀释制成每ml约含多肽3.2mg的供试品溶液。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A液：称取醋酸钠15.2g，加水1500ml溶解，用醋酸调pH至6.5，然后加水至1800ml，加乙腈140ml。流动相B液：量取乙腈400ml，加水至500ml。用0.45μm滤膜过滤。检测波长为254nm，柱温：43℃。

按如下进行梯度洗脱：

梯度：

时间（min）

流速（ml/min）

B%

时间（min）

流速（ml/min）

B%

8.00

1.00

15

24.00

1.00

100

17.00

1.00

34

4.01

1.00

0

21.01

1.00

100

30.00

1.00

STOP

对照品溶液的制备：精密称取丝氨酸、精氨酸、胱氨酸、酪氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、色氨酸适量置50ml量瓶中，加0.1mol/L的盐酸溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml及称取适量的门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸均置100ml量瓶中，加0.1mol/L的盐酸溶解并稀释至刻度，摇匀，制成相应浓度的溶液。

精密量取对照品溶液和供试品溶液各200μl分别置1ml的离心管中，同时加内标溶液20μl，加入1mol/L的三乙胺乙腈溶液100μl，加入0.1mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μl，混匀，室温放置1小时，加入正己烷400μl，放置10分钟，取下层溶液，用0.45um滤膜过滤。

本品每1ml含游离氨基酸不少于3.3mg。

计算公式

式中AS和AR分别为内标物质和对照品的峰面积；

CS为加入内标物质的浓度；

CR为加入对照品的浓度。

式中分别为供试品和内标物质的峰面积；

为供试品的浓度；

为加入内标物质的浓度。

允许误差参见《检验工作管理程序》

5.6.3总氮

操作方法取本品15.0ml至100ml量瓶中，加水稀释至刻度制成每ml约含多肽3.2mg的供试品溶液，取供试品溶液10ml，参见《Kjeltec8400型凯氏定氮仪使用及维护保养标准操作程序》，依法测定。每1ml含总氮应不少于1.9mg。

允许误差参见《检验工作管理程序》

5.6.4核