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核酸的超速离心核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序超速离心原理PCRDNA合成当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时，由于重力场的作用使得悬浮的颗粒逐渐下沉。粒子越重，下沉越快，反之密度比液体小的粒子就会上浮。物质在介质中沉降时还伴随有扩散现象。扩散是无条件的绝对的。扩散与物质的质量成反比，颗粒越小扩散越严重。沉降是相对的，有条件的，要受到外力才能运动。沉降与物体重量成正比，颗粒越大沉降越快。颗粒越小沉降越慢，而扩散现象则越严重。利用离心机产生强大的离心力，才能迫使这些微粒克服扩散产生沉降运动。离心就是利用离心机转子高速旋转产生的强大的离心力，加快液体中颗粒的沉降速度，把样品中不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。小结核酸的超速离心核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序超速离心机PCRDNA合成小结核酸的凝胶电泳核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成凝胶电泳是核酸研究中最常用的技术。常用凝胶电泳种类琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳优点：简单、快捷、灵敏、成本低小结核酸的快速测序核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成DNA酶法测序20世纪60年代，R.W.Holley首先测定了酵母tRNAala的碱基顺序，采用的类似氨基酸测序的重叠法，非常烦琐。1975年，Sanger采用了一种新型的快速测序方法-加减法（p518,图15-4)。1977年Sanger改进了测序方法，称为末端终止法，速度更快。根据Sanger的方法，现在已经有各种自动化测序仪，DNA的测序工作更加快捷，人类基因组测序因此得以提前完成。小结核酸的快速测序核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成DNA酶法测序小结核酸的快速测序核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成DNA酶法测序引物链模板链小结核酸的快速测序核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成DNA酶法测序小结核酸的快速测序核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成DNA酶法测序由Sanger终止法原理设计的DNA测序仪原理小结核酸的快速测序核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成核酸的其他测序方法化学测序法：Maxam和Gilbert于1977年发明用特异的化学试剂作用于不同的碱基进行修饰然后用哌啶切除碱基，DNA链断裂成片段，末端为特异碱基变性胶电泳分离，放射自显影得到测序图谱。判断方法同Sanger终止法。RNA测序：用特异酶切断特异碱基位置的核酸链。电泳分离得到测序图谱，同Sanger终止法。化学试剂断裂RNA，电泳得到测序图谱。逆转录生成DNA，然后用DNA测序法。小结聚合酶链式反应核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成小结5’-OH用DMT保护①核苷吸附于硅固相柱上②移除保护基团碱基用苯甲酸保护DNA的化学合成核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成小结核苷3’位活化氰乙基保护基团二异丙基乙胺活化基团③下一个核苷加入二异丙基乙胺副产物DNA的化学合成核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成小结④氧化形成磷酸基重复②③④步直到所有核苷残基都加入到链上⑤去除碱基上的保护基团⑥去除磷酸基上的氰乙基保护基团⑦断开硅柱链接寡核苷酸链释放DNA的化学合成核酸结构核酸通论研究方法理化性质分离提纯超速离心凝胶电泳核酸测序PCRDNA合成小结核酸的水解核酸结构核酸通论研究方法理化性质小结箭头所指为水解的位置核酸的水解核酸结构核酸通论研究方法理化性质小结酶水解嘧啶碱基3’5’2’1’4’5’二核苷酸核苷3’-磷酸嘧啶核苷2’,3’-环磷酸核苷RNsae水解嘧啶核苷酸3’-磷酸二酯键断开磷酸二酯键释放核苷和2’,3’-环