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晚期内皮祖细胞复合纳米级左旋聚乳酸构建生物化组织工程血管的实验探索

一、引言

1.1研究背景与意义

随着社会经济的发展和人们生活方式的改变，心血管疾病已成为全球范围内威胁人类健康的主要疾病之一。据统计，心血管病死亡占城乡居民总死亡原因的首位，农村为44.8%，城市为41.9%，其疾病负担日渐加重，已成为重大的公共卫生问题。目前，心血管疾病的治疗方法包括药物治疗、介入治疗和手术治疗等，其中血管重建手术是治疗严重心血管疾病的重要手段。然而，临床上可供移植的自体血管来源有限，且存在取材部位创伤、血管长度和直径受限等问题。因此，寻找一种理想的血管替代物成为心血管领域的研究热点。

组织工程血管作为一种新兴的血管替代物，具有良好的生物相容性、可降解性和生物活性等优点，为解决血管替代物的短缺问题提供了新的思路。其基本原理是将种子细胞与生物材料支架相结合，在体外构建具有一定结构和功能的血管组织，然后移植到体内，替代受损的血管。在组织工程血管的构建中，种子细胞和生物材料的选择至关重要。

晚期内皮祖细胞（LateEndothelialProgenitorCells,LEPCs）是一种具有高度增殖和分化能力的细胞，能够分化为成熟的内皮细胞，在血管新生和修复过程中发挥着重要作用。与早期内皮祖细胞相比，晚期内皮祖细胞具有更强的增殖能力、更低的免疫原性和更好的血管形成能力，因此被认为是构建组织工程血管的理想种子细胞。

纳米级左旋聚乳酸（NanoscalePoly-L-lacticAcid,nPLLA）是一种新型的生物可降解材料，具有良好的生物相容性、机械性能和可加工性。其纳米级的尺寸效应使其能够更好地模拟细胞外基质的结构和功能，促进细胞的黏附、增殖和分化。此外，nPLLA还具有可调控的降解速率，能够在血管组织修复过程中逐渐降解，为新生血管组织的生长提供空间。

本研究旨在利用晚期内皮祖细胞复合纳米级左旋聚乳酸构建生物化组织工程血管，并对其性能进行系统研究。通过该研究，有望开发出一种具有良好生物相容性、机械性能和血管形成能力的新型组织工程血管，为心血管疾病的治疗提供新的策略和方法，具有重要的理论意义和临床应用价值。

1.2国内外研究现状

在组织工程血管的研究方面，国内外学者已取得了一定的成果。国外早在20世纪80年代就开始了组织工程血管的研究，经过多年的发展，已经有多种组织工程血管进入临床试验阶段。例如，Humacyte公司的SYMVESS组织工程血管（6毫米内径）于2024年12月19日获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准上市，用于下肢动脉外伤需急诊血运重建的成人患者，避免截肢。该产品具有独特的再生特性，植入体内血管管腔可快速内皮化、管壁再细胞化，从而极大提高远期通畅率，并可抵抗感染。国内的组织工程血管研究起步相对较晚，但近年来发展迅速。一些研究团队通过优化种子细胞和生物材料的选择，以及改进血管构建技术，成功构建出具有良好性能的组织工程血管。例如，南开大学孔德领教授团队历经近20年研发的“组织工程增强型生物人工血管”，将可降解的材料作为骨架，在动物体内包裹成型后，经脱细胞处理后再植入到人体内，随着时间推移，人工材料会逐渐降解，最终被患者自身的细胞替代，相当于“长”出一根属于自己的血管，并已在重医附一院开启首次应用于人体的临床试验。

在内皮祖细胞的研究方面，国外学者对内皮祖细胞的来源、生物学特性、分化机制等进行了深入研究。发现内皮祖细胞主要来源于脐静脉血、成人外周血、骨髓等，具有游走特性，CD34、CD133、VEGFR-2等表面标记阳性，体外培养后能增殖并分化为血管内皮细胞。国内学者则在内皮祖细胞的分离、培养和扩增技术方面取得了一定的进展，建立了多种高效的内皮祖细胞分离和培养方法，为其在组织工程血管中的应用提供了技术支持。

在纳米级左旋聚乳酸应用于血管构建方面，国内外研究主要集中在材料的制备、性能优化以及与细胞的相互作用等方面。通过静电纺丝、纳米压印等技术制备出具有纳米级结构的左旋聚乳酸材料，并对其机械性能、降解性能、生物相容性等进行了系统研究。研究发现，纳米级左旋聚乳酸材料能够促进细胞的黏附、增殖和分化，为血管组织的构建提供了良好的支架材料。然而，目前将晚期内皮祖细胞与纳米级左旋聚乳酸复合构建生物化组织工程血管的研究还相对较少，对于如何优化复合体系，提高组织工程血管的性能，仍有待进一步深入研究。

1.3研究目的与内容

本研究的目的是利用晚期内皮祖细胞复合纳米级左旋聚乳酸构建生物化组织工程血管，并对其生物学性能、机械性能和血管形成能力进行系统研究，为心血管疾病的治疗提供一种新型的组织工程血管。具体研究内容包括以下几个方面：

晚期内皮祖细胞的分离、培养与鉴定：从外周血中分离晚期内皮祖细