实验五红细胞计数、Hb测定.pptVIP

实验五

一、红细胞显微镜计数

二、血红蛋白测定

一、红细胞计数

红细胞计数指测定单位体积血液中红细胞的数量。

显微镜计数法

血细胞分析仪法

1.红细胞显微镜计数法

用等渗稀释液将血液稀释一定的倍数后，滴入计数板，在显微镜下计数一定范围内红细胞数，经换算可求得每升血液中的红细胞数。

红细胞稀释液

Hayem液

枸橼酸钠稀释液

普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水

①Hayem液

主要成分及作用：

NaCl调节渗透压；

Na2SO4调节渗透压，提高比重防止细胞粘连；

HgCl2防腐；

蒸馏水

缺点：遇高球蛋白血症患者，由于蛋白质沉淀而使红细胞易凝集。

②枸橼酸钠稀释液

主要成分及作用：

NaCl调节渗透压；

枸橼酸钠调节渗透压，抗凝；

甲醛防腐；

蒸馏水

优点：配制简单，可使红细胞在稀释后较长时间保持正常形态并且不凝集，故应用较广。

参考值

红细胞数（×1012/L）

成年男性

4.0～5.5

成年女性

3.5～5.0

新生儿

6.0～7.0

二、血红蛋白测定

亚铁血红素

无种属特异性；

由Fe2+和原卟啉组成；

铁原子位于卟啉环中央，具有6条配位键；

其中4条与原卟啉中心的4个吡咯环氮原子连接；

另2条配位键与血红素分子平面垂直，分别与平面两侧的配体（1个珠蛋白肽链，1个O2）连接。

血红蛋白及其衍生物

氧合Hb（Hb02）：呈鲜红色；

还原Hb（Hbred）：呈暗红色；

碳氧Hb（HbCO）：呈樱桃红色；

高铁Hb（Hi）：呈红褐色；

氰化高铁Hb（HiCN）：呈棕红色，540nm处有一较宽吸收峰。

血红蛋白测定方法及评价

血红蛋白测定，即测定血液中各种血红蛋白的总浓度。

氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法

十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白

（SLS-Hb）测定法

碱羟血红蛋白（AHD575）测定法

叠氮血红蛋白（HiN3）测定法

溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法

血细胞分析仪法

（三）血红蛋白测定方法及评价

血红蛋白测定，即测定血液中各种血红蛋白的总浓度。

氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法

十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白

（SLS-Hb）测定法

碱羟血红蛋白（AHD575）测定法

叠氮血红蛋白（HiN3）测定法

溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法

血细胞分析仪法

目前常用方法

氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法

⑴原理

血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi再与试剂中CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN在540nm处有一吸收峰。根据标本的吸光度，即可求得血红蛋白的浓度。

⑶计算公式

Hb(g/L)=

A

44

×

1000

64458

×251

=A×367.7

A为测定管吸光度

44为毫摩尔消光系数

64458/1000为1mmol/LHb溶液中所含Hb克数

251为稀释倍数

⑷优缺点

优点

ICSH和WHO推荐的参考方法；

操作简便、结果稳定可靠；

除SHb外其它Hb衍生物均可检测；

读取吸光度后可直接定值。

缺点

试剂中含剧毒药氰化钾；

不能测定SHb，对HbCO转化较慢；

遇高球蛋白或高白细胞血症试剂易混浊。

参考区间

成年男性

120～160g/L

成年女性

110～150g/L

新生儿

170～200g/L

临床意义

RBC和Hb增多

成年男性RBC＞6.0×1012/L,Hb＞170g/L

成年女性RBC＞5.5×1012/L,Hb＞160g/L

RBC和Hb减少

红细胞和血红蛋白低于参考值的下限，为红细胞和血红蛋白减少，通常称贫血。