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甜味蛋白基因Brazzein在森林草莓中的遗传转化及效应研究

一、引言

1.1研究背景与意义

随着人们生活水平的提升，对健康饮食的关注度与日俱增。传统糖类食品虽能带来愉悦的甜味体验，但其高热量、高糖分的特性对人体健康产生了诸多负面影响，如肥胖、糖尿病、心血管疾病等发病率呈上升趋势。在此背景下，开发低糖或零糖的天然甜味剂成为食品领域的研究热点，对改善人们饮食结构、提升健康水平具有重要意义。

在众多天然甜味剂研究中，植物甜味蛋白脱颖而出。甜味蛋白是一类能够产生甜味感觉的蛋白质，具有甜度高、热量低、安全无毒等优点，符合现代消费者对健康食品的追求。Brazzein作为一种备受瞩目的甜味蛋白，最早从非洲西部野生植物PentadiplandraBrazzeanaBaillon的果实中分离提纯而来。其甜度极高，是等质量蔗糖的2000倍以上，这意味着只需极少量的Brazzein就能达到与大量蔗糖相同的甜味效果，大大降低了热量摄入。同时，Brazzein还具备良好的热稳定性和pH稳定性，在80℃下经4h的热处理仍然保持甜味，在较宽的pH范围内性质稳定，这使得它在食品加工和储存过程中能够保持其甜味特性，具有广泛的应用前景，被广泛视为一种理想的甜味剂，已应用于一些食品和饮料的研发中。然而，Brazzein在自然界中的产量极低，从天然植物中提取的成本高昂，难以满足大规模生产的需求，限制了其在食品工业中的广泛应用。因此，如何提高Brazzein的产量，成为目前甜味蛋白研究领域亟待解决的主要问题之一。

森林草莓（Fragariavesca）是一种优质的果蔬类作物，属于蔷薇科草莓属，广泛分布于亚洲和北美地区。它营养丰富，富含维生素C、维生素E、酚类物质等多种对人体有益的成分，具有抗氧化、抗炎、预防心血管疾病等保健功效。森林草莓口感鲜美，风味独特，深受消费者喜爱。然而，作为一种野生小果类作物，森林草莓的自然产量并不高，难以满足市场对其日益增长的需求。因此，寻找一种有效途径提高森林草莓的产量和品质，成为当前该作物领域的研究热点之一。

本研究将利用遗传工程的方法，将甜味蛋白基因Brazzein导入森林草莓中，旨在通过转基因技术实现一举两得的目标。一方面，提高森林草莓的甜度，使其果实更加甜美可口，满足消费者对甜味水果的需求，同时也为开发新型低糖或零糖水果产品提供了可能；另一方面，探索利用外源基因提高森林草莓产量和营养价值的可行性，为森林草莓的品种改良和高效栽培提供新的技术支持。此外，本研究的成功还将为植物遗传转化技术的发展提供新的思路和方法，推动新型甜味剂的研究与开发，具有重要的理论意义和实践价值。

1.2国内外研究现状

1.2.1甜味蛋白基因研究现状

自甜味蛋白被发现以来，国内外学者对其进行了广泛而深入的研究。目前，已发现的植物甜味蛋白有8种，包括索马甜（Thaumatin）、莫乃灵（Monellin）、马宾灵（Mabinlin）、布拉齐因（Brazzein）、库克灵（Curculin）、神秘果蛋白（Miraculin）等。这些甜味蛋白在甜度、结构、稳定性等方面各具特点。例如，索马甜的甜度是蔗糖的3000倍，由207个氨基酸组成，含有16个半胱氨酸形成8个二硫键，具有良好的热力学稳定性和抗压性；莫乃灵甜度较高，是蔗糖的3000倍，天然莫乃灵由94个氨基酸组成，含有一个半胱氨酸，不存在二硫键，其热稳定性较低。

Brazzein作为一种独特的甜味蛋白，其研究也取得了一定进展。在结构研究方面，Brazzein是由54个氨基酸残基组成的单链多肽，含有8个半胱氨酸，形成4对分子内二硫键，分子量为6500，等电点为5。其二级结构包含一个α-螺旋（残基21～29）和三个反向平行的β-折叠（链I，残基5～7；基链II，残基44～50；链III，残基34～39），四个二硫键相互交联成次级结构。这种独特的结构赋予了Brazzein高强度的甜味和良好的稳定性。在基因工程表达方面，科学家们尝试利用不同的表达系统来生产Brazzein，如大肠杆菌、酵母等微生物表达系统，以及植物表达系统。Hellekant等人用大肠杆菌成功表达了Brazzein，但存在蛋白表达量低、活性不高等问题。近年来，利用植物表达系统生产Brazzein成为研究热点，通过将Brazzein基因转入植物中，使其在植物体内表达，有望实现Brazzein的大规模生产。

1.2.2森林草莓遗传转化研究现状

森林草莓作为一种重要的模式植物和小果类作物，其遗传转化技术的研究也取得了显著进展。目前，常用的森林草莓遗传转化方法主要有农杆菌介导法和基因枪法。农杆菌介导法是利