高中生物选修学案专题：PCR技术原理与实验操作.pdfVIP

学习目标

1.了解PCR技术的基本操作

2.理解PCR的原理

3.讨论PCR的应用

学习重点

PCR的原理

学习难点

PCR技术的基本操作

课前预习

使用说明与学法指导

根据学习目标，认真预习，用红笔标注重点与难点；15分钟完成课前预习内容。

知识准备1.搜集相关知识并阅读2．复习回顾分子的组成成分和结构

3．PCR原理：的过程

助读一、基础知识

1.多聚酶链式反应的概念：

2.多聚酶链式反应的应用：的诊断、、、

、和等各方面。

3.的两条链是的，通常将的羟基末端称为，而磷酸基团的末

端称为。聚合酶不能开始合成，而只能，因此，

需要引物。的合成方向总是。

4.在的过程中，的前提是。在体外可通过控

制来实现。在的温度范围内，的双螺旋结构将，双链分开，这个

过程称为。PCR利用了的原理，通过控制温度来控制双链的解聚

与结合。由于PCR过程的温度高，导致聚合酶失活，后来的聚合酶的发现和

应用，大大增加了PCR的效率。

5.PCR反应需要在一定的缓冲溶液中：，，

，，同时通过控制温度使在体外反复进

行。

二、PCR的反应过程和三

1（）、PCR一般要经历循环，每次循环可以分为、延伸

步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由

而成的单链会与结合，进行的延伸，这样，聚合酶只

能，使这段固定长度的序列成指数扩增。

2（）、PCR的反应过程

变性复性延伸

变性：在℃时解旋

复性：在℃时引物与单链结合

延伸：在℃时合成子链（两个引物间的序列）

三、实验操作

在中，做PCR通常使用，它是一种薄壁塑料管。具体操作时，用微量

移液器，按PCR反应体系的配方在中依次加入各组分，再参照P62表的设置

设计好PCR仪的循环程序即可。

四、操作提示

1（）、为避免外源等因素的污染，PCR实验中使用的、、以及

蒸馏水等在使用前必须进行。

2（）、PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在。使用前，将所需试剂从冰

箱拿出，放在冰块上缓慢融化。在微量离心管中添加反应成分时，移液管