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脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识

一、前言

脂肪组织来源的干细胞（Adipose-derivedStemCells,ADSCs）因其来源丰富、获取相对无创、增殖能力强及多向分化潜能等特性，在再生医学、细胞治疗及组织工程领域展现出巨大的应用前景。随着相关研究的深入和临床转化的推进，ADSCs的规范化提取、制备及储存对于保证其安全性、有效性及临床应用的顺利开展至关重要。目前，ADSCs的研究和应用在技术方法、质量控制等方面尚存在一定差异，缺乏统一的标准和规范，这可能影响研究结果的可靠性和临床治疗的安全性。为此，我们组织相关领域专家，结合国内外最新研究进展和实践经验，就ADSCs的提取、制备及储存过程中的质量管理达成以下共识，旨在为ADSCs的规范化研究和应用提供指导性意见，促进该领域的健康发展。

二、范围与定义

本共识适用于从事ADSCs基础研究、临床前研究及临床应用的机构和人员，涉及ADSCs从脂肪组织获取、干细胞提取、体外培养扩增、鉴定、冻存及复苏等环节的质量管理。

脂肪组织来源的干细胞（ADSCs）：指从脂肪组织中分离获得的，具有自我更新能力和多向分化潜能（如向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞等分化）的一类成体干细胞。

质量管理：指在ADSCs提取、制备、储存及相关活动中，为实现质量目标而进行的指挥和控制组织的协调活动，包括质量策划、质量保证、质量控制和质量改进。

三、脂肪组织的获取与质量管理

（一）供体评估与筛选

供体的健康状况直接影响ADSCs的质量和安全性。应对供体进行严格的筛选和评估，包括：

1.健康史采集与体格检查：详细询问供体既往病史、手术史、过敏史、传染性疾病史（如乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒等）、近期用药史、吸烟饮酒史及家族遗传病史等，并进行必要的体格检查。

2.实验室检测：对供体进行传染性疾病标志物筛查，如乙肝表面抗原（HBsAg）、丙肝抗体（Anti-HCV）、人类免疫缺陷病毒抗体（Anti-HIV1/2）、梅毒螺旋体抗体（Anti-TP）等。根据临床需求和伦理要求，可考虑进行其他相关病原体检测及遗传学筛查。

3.排除标准：存在严重系统性疾病、恶性肿瘤病史、急性感染期、自身免疫性疾病活动期、长期使用免疫抑制剂或细胞毒性药物、以及已知对ADSCs治疗有禁忌的供体应予以排除。

（二）脂肪组织采集

1.采集部位与方式：应根据供体情况和临床需求选择合适的采集部位，常用腹部、大腿内侧等。采集方式应遵循微创原则，通常采用抽脂术（如负压抽脂、水动力抽脂等）或开放性手术获取脂肪组织。操作过程应严格遵守无菌操作规程，避免组织污染。

2.采集量：根据后续实验或治疗需求确定采集量，同时兼顾供体的安全与耐受度。

3.样本标识与记录：采集的脂肪组织样本应立即进行唯一标识，清晰记录供体信息、采集日期、时间、部位、采集量、采集过程中的特殊情况等。

4.采集过程中的质量控制：

*操作人员需经过专业培训，熟悉采集流程和无菌操作要求。

*使用一次性无菌采集器械和容器。

*避免在采集过程中对脂肪组织施加过度机械损伤或高温刺激。

*若需使用局部麻醉剂，应选择对细胞活性影响较小的种类和浓度，并记录所用麻醉剂信息。

四、ADSCs的分离、提取与制备

（一）实验室环境与设备要求

1.实验室环境：ADSCs的分离、培养应在符合GMP要求或同等洁净级别的细胞操作室（如生物安全柜、洁净工作台）内进行。实验室应定期进行环境监测，包括空气洁净度、温湿度、压差等。

2.仪器设备：用于ADSCs分离、培养、检测的仪器设备（如离心机、培养箱、移液器、生物安全柜、倒置显微镜等）应定期进行校准、维护和保养，确保其性能稳定、准确可靠，并保留相关记录。

（二）脂肪组织处理与ADSCs分离

1.组织运输与接收：采集的脂肪组织应尽快送至实验室处理。运输过程中应保持适当的温度（通常为室温或4℃，具体根据运输时间和方案确定），避免剧烈震荡。实验室接收样本时，需核对样本标识、检查样本状态，并记录接收时间和样本质量。

2.脂肪组织清洗：用适量的无菌磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水多次清洗脂肪组织，以去除残留的血液、麻醉剂、油脂及细胞碎片。

3.胶原酶消化：将清洗后的脂肪组织剪碎或切碎，加入适当浓度和活力的胶原酶（如I型或II型胶原酶）进行消化。消化条件（酶浓度、消化温度、时间、振荡速度等）应根据胶原酶特性和组织特性进行优化并严格控制，以提高细胞得率和活性，减少对细胞的损伤。

4.终止消化与离心分离：达到预定消化时间后，加入含血清的培养基或专用终止液终止胶原酶活性。将消化后的混合液进行离心，分离得到富含ADSCs的基质血管组分（StromalVascularFraction,SV