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2025年度检验科体液微生物组SOP培训考核试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共20题，40分）

1.关于脑脊液微生物组样本采集，以下操作正确的是：

A.腰椎穿刺后直接用普通干燥试管收集5ml样本

B.采集后室温放置2小时再送检

C.使用无菌带肝素抗凝的离心管收集3-5ml样本

D.穿刺部位消毒后无需等待酒精挥发立即采集

答案：C

解析：脑脊液需无菌采集，抗凝选择肝素（避免EDTA抑制部分微生物），采集量3-5ml，需4℃冷藏2小时内送检，消毒后需待酒精挥发（避免残留杀菌）。

2.关节液微生物组检测中，用于厌氧培养的样本运输方式应为：

A.普通离心管密封后常温运输

B.厌氧运输管（含还原剂）4℃保存

C.37℃保温箱运输

D.加入2%甲醛固定后运输

答案：B

解析：厌氧微生物需在无氧环境中运输，厌氧运输管含还原剂（如半胱氨酸）维持低氧状态，4℃可抑制需氧菌过度增殖，甲醛会破坏微生物结构。

3.胸腔积液样本预处理时，离心参数设置正确的是：

A.1000rpm离心5分钟

B.3000rpm离心15分钟

C.5000rpm离心30分钟

D.8000rpm离心10分钟

答案：B

解析：体液样本离心需兼顾微生物收集效率与细胞破碎控制，3000rpm（约1500×g）15分钟可有效沉淀细菌（直径0.5-5μm），过高转速可能导致真核细胞破裂释放DNA污染。

4.16SrRNA基因扩增时，选择V3-V4区域的主要原因是：

A.扩增片段最短，节省测序成本

B.该区域在细菌中保守性最高

C.覆盖更多菌属的鉴别信息

D.避免与宿主线粒体DNA同源

答案：C

解析：V3-V4区域（约460bp）在细菌中变异度适中，既能保证通用引物结合（保守区），又包含足够的可变区用于菌属鉴别，是目前微生物组测序的金标准区域。

5.体液微生物组检测中，内参菌（如热灭活的金黄色葡萄球菌）的主要作用是：

A.评估样本处理过程中的DNA损失率

B.作为阳性对照验证测序平台准确性

C.区分样本污染与真实菌群

D.标准化不同样本的测序深度

答案：A

解析：内参菌需在样本处理前加入（如裂解前），通过检测其DNA回收率，评估裂解效率、提取损失等步骤对微生物DNA的影响，用于后续数据校正。

6.关于体液样本DNA提取，错误的操作是：

A.使用溶菌酶预处理革兰阳性菌

B.加入RNase去除RNA干扰

C.采用磁珠法提取避免苯酚残留

D.离心柱法洗脱时使用100μlTE缓冲液

答案：D

解析：离心柱法洗脱体积通常为50-100μl，体积过小可能导致洗脱不充分，需根据样本量调整；TE缓冲液（含EDTA）可能抑制后续PCR，推荐使用无酶水。

7.高通量测序质量控制中，Q30值要求≥85%的含义是：

A.85%的碱基测序错误率≤0.1%

B.85%的读长长度≥300bp

C.85%的序列与参考数据库匹配

D.85%的样本重复间一致性≥90%

答案：A

解析：Q30表示碱基正确识别的概率为99.9%（错误率0.1%），Q30≥85%是保证测序数据可靠性的基本要求。

8.厌氧菌培养时，厌氧罐中催化剂（钯粒）失效的判断依据是：

A.指示剂（美蓝）由蓝色变为无色

B.厌氧罐压力计显示负压

C.指示剂（刃天青）由粉色变为无色

D.指示剂（美蓝）由无色变为蓝色

答案：D

解析：美蓝在无氧环境中呈无色，有氧时变蓝；钯粒失效后无法催化氧气与氢气结合生成水，罐内残留氧气会使美蓝重新变蓝。

9.脑脊液样本中检出人型支原体（Mycoplasmahominis），首先应考虑：

A.样本被尿道分泌物污染

B.中枢神经系统感染

C.实验室环境支原体污染

D.患者近期使用免疫抑制剂

答案：A

解析：人型支原体主要定植于泌尿生殖道，脑脊液中检出需优先考虑采集时污染（如穿刺部位未严格消毒，或样本接触尿道分泌物）。

10.微生物组测序结果中，α多样性指数（Chao1）显著降低的可能原因是：

A.样本中优势菌过度增殖（如脓毒症）

B.样本运输时间过长（6小时）

C.测序深度不足（5万条/样本）

D.以上均可能

答案：D

解析：优势菌增殖会抑制其他菌群（多样性降低）；运输时间过长导致部分微生物死亡（菌群失衡）；测序深度不足可能漏检低丰度菌（低估多样性）。

11.关于体液样本保存，正确的是：

A.关节液4℃保存不超过24小时

B.胸腔积液-20℃冻存可保存3个月

C.脑脊液室温放置不超过1小时

D.腹水-80℃冻存可保存1年

答案：D

解析：体液样本4℃保存通常不超过6小时（避免微生物增殖/死亡）；-20℃冻存可能因冰晶破坏微生物结构，推荐-80℃（可保存1年以上）；脑脊