HPLC使用常见问题.pptVIP

HPLC使用时常见问题分析

;一、规范操作;HPLC的环境设置;;;;滤膜类型

聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。

醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。

尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。;脱气

除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡

气泡对测定的影响：

1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积

2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形

3）检测器中的气泡产生基线波动;色谱柱柱内体积和平衡时间;Agilent1100手动进样器工作原理;工作原理;1）进样应使用液相色谱专用平头

进样针

2）进样时，进样针应插到底

3）转动手柄时应尽快，不要停留在中途

4）不使用时将针头留在进样器内

5）样品溶液pH小于10,常用密封垫的材质适用pH10,否则换特氟隆材质的密封垫pH10-13

6）分析结束后冲洗进样口，清洗应使用专用针口清洗器;7）手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。

8）在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。手动进样时应注意，针中不能有气泡，在Load状态进样时推针要慢，由Load切换到inject时动作要迅速，停留半分钟后取针，进样后应洗针。;9）六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。使用部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的75％，如20μl的定量环最多进样15μl的样品，并且要求每次进样体积准确、相同；使用完全装液法进样时，进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20μl的定量环最少进样60至100μl的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。推荐采用100ul的平头进样针配合20ul满环进样。;;泵的保养：;紫外灯的保养;二、常见问题分析;;;;;

样品溶剂效应;;;

色谱柱;;;;;色谱柱的故障;滤片或填料堵塞;样品或流动相中杂质吸附;现象：无压力，流动相不流动

可能原因

1、保险丝断或电源问题

2、柱塞杆折断

3、泵头内有空气或流动相不足

4、单向阀损坏

5、漏液

6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力);现象：压力持续偏高或不断上升

1、流速设定过高

2、保护柱或柱子筛板堵塞

3、流动相使用不当或有缓冲盐析出

4、色谱柱选择不当

5、进样阀损坏

6、线路过滤器堵塞

;现象：压力持续偏低

1、流速设定过低

2、色谱柱选择不当

3、柱温过高

4、系统漏液;压力异常;漏液;漏液;进样阀漏液

可能原因

1、转子密封损坏

2、定量环堵塞

3、进样口密封松动

4、进样针尺寸不合适

5、废液管产生虹吸

6、废液管堵塞;检测器漏液

可能原因

1、流通池垫片损坏

2、流通池透镜破碎

3、手紧接头处漏液

4、废液管堵塞

5、流通池堵塞;谢谢！