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本节聚焦:什么是动物细胞融合技术?单克隆抗体是如何制备的?在临床上有哪些应用?第2节动物细胞工程(二)动物细胞融合技术和单克隆抗体(2课时)
荧光标记的小鼠细胞和人细胞融合实验示意图导(1min)温故而知新:意义:打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,培育植物新品种。必修一P43
自主阅读教材P48,思考下列问题一、动物细胞融合技术思+议(4min)1.动物细胞融合技术的概念、原理、结果分别是什么?2.动物细胞融合技术常用的诱导方法有哪些?4.动物细胞融合技术有何意义?在现实生活中的应用有哪些?《任务一》3.什么是灭活?灭活病毒诱导融合的原理?融合实质及完成的标志?(教材P48的相关信息)
01⑵灭活病毒诱导细胞融合的原理:⑴灭活:病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。⑶融合实质及完成的标志:一、动物细胞融合技术指用物理或化学手段使病毒失去感染能力(不感染细胞),但是并不破坏病毒的抗原结构(诱导细胞融合)。细胞核的融合生物法-灭活病毒诱导法展+评(8min)
1.概念:指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。2.原理:细胞膜具有一定的流动性3.结果:形成具有原来两个或多个细胞的遗传信息的杂交细胞。4.诱导方法:与植物原生质体融合的方法相同物理法电融合法等化学法聚乙二醇(PEG)融合法生物法灭活病毒诱导法动物细胞融合特有P49一、动物细胞融合技术展+评(8min)
一、动物细胞融合技术展+评(8min)突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。至今,种间、属间、科间,甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得成功。研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。特别是杂交瘤技术,为制造单克隆抗体开辟了新途径。5.意义:6.应用:
比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理步骤细胞融合成功的标志诱导方法结果意义细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞的全能性用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁↓诱导方法原生质体融合↓形成杂种细胞↓经植物组织培养杂种植株两个或多个动物细胞↓诱导方法动物细胞融合↓形成杂交细胞电融合法、离心法、聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+—高pH融合法电融合法、PEG融合法、灭活病毒诱导法形成杂种植株形成杂种细胞打破生殖隔离,实现远缘杂交育种突破有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能再生出新的细胞壁细胞核的融合两者比较(课外作业)学习指导P55
[典例2]下列关于动物细胞融合与植物体细胞杂交技术的说法,正确的是()A.基本原理相同B.诱导细胞融合的方法相同C.细胞融合前的处理过程相同D.融合后都需要进行筛选学习指导P55【典题·例析】检(1min)D
2.抗体的传统生产方法:温故而知新:缺点:产量低、纯度低、特异性差B淋巴细胞不可能无限增殖反复注入单一B淋巴细胞细胞群克隆产生大量纯度高特异性强的抗体1.抗体特异性抗体多达百万种每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体特定抗原导(3min)
2.抗体的传统生产方法:温故而知新:缺点:产量低、纯度低、特异性差反复注入单一B淋巴细胞细胞群克隆产生大量纯度高特异性强的抗体1.抗体特异性抗体多达百万种每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体特定抗原导(3min)
自主阅读教材P48-49,思考下列问题二、单克隆抗体制备思+议(7min)1.米尔斯坦和科勒极富创造力的实验方案?2.简述制备单克隆抗体的流程?①用特定抗原对小鼠进行免疫的原因?②骨髓瘤细胞、免疫的B淋巴细胞各有何特点?③免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后,得到的细胞是否都是杂交瘤细胞?杂交瘤细胞有何特点?④杂交瘤细胞是如何筛选出来的?⑤是否所有的杂交瘤细胞都能产生所需的抗体?⑥如何扩大培养得到大量的单克隆抗体?《任务二》
二、单克隆抗体1.米尔斯坦和科勒极富创造力的实验方案?动物细胞融合杂交瘤细胞动物细胞培养单克隆抗体骨髓瘤细胞(癌细胞)能无限增殖一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体既能迅速大量增殖,又能产生专一抗体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒发明了单克隆抗体的制备技术,于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。米尔斯坦【英国】科勒【德国】展+评(12min)
02从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。p49图2-16(整体感知)2.制备单克隆抗体的流程展+评(12min)
为了获得产生特定抗体的B细胞免疫的B淋巴细胞:骨髓瘤细胞:2.制备单克隆抗体的流程杂交瘤细胞:⑴注射特定抗原⑵诱导融合既能迅速大量增殖,
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