苯硫脲尝味遗传大实验.pptVIP

遗传学大实验注意事项

1．实验的每一步都要详细地记录操作内容、时间、步骤、结果等，以备查询。

2．对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作（尤其是微量移液器）。在操作的过程中发现任何意外的现象都要及时向任课教师汇报。

3．在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾筐里（或先放在自己的桌面一角），严禁随地投弃！特别注意对废弃细菌的杀灭和有毒垃圾的定点投放。

4.实验结束后要把用过的器皿清洗后归放整齐并清点数目，向教师汇报征得同意后方可离开实验室。

1.实验目的

（1）测定人群中PTC尝味基因的表现型和基因型，理解孟德尔遗传基因型与表现型的对应关系。

（2）了解酶切扩增多态序列（cleavedamplifiedpolymorphicsequence，CAPS）

（又称为PCR-RFLP）技术的原理，学会用CAPS技术检测单核苷酸多态性

（SNPs）。在分子水平上测定PTC尝味的基因型。

（3）计算群体中PTC尝味的基因频率，判断群体是否达到Hardy-weiberg平衡。

PTC尝味能力是受单基因控制的孟德尔遗传性状，是由位于7号染色体上（7q35-7q36）的一种苦味味觉感受器基因TAS2R38决定的，属于常染色体不完全显性遗传。尝味者中显性基因T的纯合子(TT)能尝出1／750,000~1／6,000,000的PTC溶液的苦味，杂合子(Tt)只能尝出1／480,000～l／380,000的PTC溶液的苦味。因此可以利用对PTC的尝味能力测定家族中的基因传递和人群中的基因频率。

2.2人类苯硫脲尝味的基因

人类的PTC尝味基因Homosapienstastereceptor,type2,member38(TAS2R38)(NM_176817)，又名PTC、T2R38或T2R61。绝大多数尝味者与味盲者的区别在于三处单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphisms，SNPs)：

第一处：145位，味盲者为G145（编码丙氨酸ala），尝味者为C145（编码脯氨酸pro）；

第二处：785位，味盲者为T785（编码缬氨酸val），尝味者为C785（编码丙氨酸ala）；

第三处：886位，味盲者为A886（编码异亮氨酸ile），尝味者为G886（码缬氨酸val）。

因此味盲者PTC多肽中三处对应的氨基酸分别是ala49、val262和ile262，被称为AVI等位基因，而尝味者的三处是pro49、ala262和val262，被称为PAV等位基因（图2.2，2.3）。

图2.2味盲者PTC尝味基因编码区（CDS）序列

味盲者的PTC编码区有五个限制性内切Fnu4H1的识别位点（识别序列5’-GC↓NGC-3’），如果是尝味者，则其第785位SNP恰好形成了一个额外的Fnu4H1识别位（GCTGC）。因此可以利用这个SNP造成的限制性位点多态性，设计引物扩增包含785位SNP位点的PTC基因编码区的一部分，然后用Fnu4H1切割扩增产物，根据是否能把扩增产物切开而判定是某个人的单倍型（haplotype）。

4.2.1实验材料

4.2.1.1主要仪器设备

高压蒸气灭菌锅、磁力搅拌器、电子天平、超净工作台、恒温水浴锅、冰箱。

洁净、经121℃高压灭菌20min的容量瓶、量筒、烧杯、螺口试剂瓶，一次

性医用无菌PE手套、乳胶手套、塑料滴管，一次性纸杯，记号笔。

4.2PTC尝味能力的测定

4.2.1.2试剂和材料

（1）材料：受试者为全体修读遗传学大实验的学生。

（2）试剂：苯硫脲（PTC）结晶，娃哈哈纯净水。

4.2.1.3溶液配制

（1）原液（1号液）：称取PTC结晶0.65g，加娃哈哈纯净水500ml，在室温(20℃左右)下溶解l~2d（经常摇晃）（或60℃水浴中1h充分溶解），PTC浓度约为1／750，过滤灭菌。

（2）稀释液：用娃哈哈纯净水逐级稀释原液2~14倍，编为2-14号（表4.1）。将配好的14种浓度的PTC溶液，过滤灭菌，分别置于灭菌过的100ml螺口试剂瓶中。另取娃哈哈纯净水作为第15号液。

4.2.2实验方法

（1）让受试者正坐，仰头张嘴伸舌，用滴管滴2～3滴15号液于受试者舌根部，让受试者慢慢咽下反复咂嘴品味液体尝味，然后用纯净水做同样的试验，交替给

受试者尝味，避免受试者的臆意猜测而影响结果的准确。

（2）询问受试者能否鉴别此两