第二章--细胞生物学研究方法.pptVIP

第二章细胞生物学研究方法;第一节细胞学形态结构的观察方法;（一）普通光学显微镜;1.用于观察活体细胞；

2.特殊之处：

环形光阑：位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。

环形相板：在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。

3.原理

把光程差变成振幅差，提高了各种结构间的对比度，使其清晰可见。;莱卡相差显微镜

（物镜与照明系统颠倒）;用途：适用于观察活细胞和活组织，是体外细胞和组织培养不可或缺的工具。;DIC显微镜下的硅藻（伪彩色）;??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????

;荧光显微镜照片

（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）;（六）激光共聚焦扫描显微境;（七）当代显微镜的发展趋势;二、电子显微镜技术;Scanningelectronmicroscope（SEM）;SEMLIGHTPATHWAY;Scanningelectronmicrographofratfibroblastsgrowingontheplasticsurfaceofatissue-culturedish.

;;

2.光镜与电镜的主要区别

;第二节细胞组分的分析方法;（一）差速离心Differentialcentrifugation;Thepreparativeultracentrifuge（超速离心机）.;;速率区带离心：介质密度小于分离物质的密度生物颗粒，细胞或细胞器在十分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离；

等密度梯度离心：介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。;二免疫细胞化学;（三）放射自显影术;四、流式细胞技术;应用举例：

１．人类基因组测序：将分离荧光标记的染色体，进一步建立基因图谱。

２．奶牛性别决定：分离所需的细胞;第三节细胞培养、细胞工程与显微操作技术;2.细胞株：仍保持原来染色体二倍体数量，以及接触抑制行为。

3.细胞系：染色体发生明显改变，呈亚二倍体或非整倍体，接触抑制丧失，容易传代培养。

4.基本形态

成纤维样细???：指棱形的平行排列或交叉成网的细胞

上皮样细胞：指形态规则，边缘清晰，排列紧密的六角形细胞

5.ES细胞培养（？）;实验室中常用的几种细胞系;

三、单层培养与悬浮培养

单层培养：

大多数培养细胞属于贴壁依耐性细胞，这类细胞悬浮在培养瓶中几十分钟至几小时后，就呈单层贴附瓶比上。

悬浮培养：

淋巴细胞、某些癌细胞及白血病细胞等常用悬浮培养的方法。