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弥散性血管内凝血(DIC)

家兔模型及机制;凝血;DIC概念

DIC不是一种独立的疾病。它是一种发生在

多种疾病基础上，凝血系统被异常激活而发

生的以凝血功能失常为主要特征的系列性病

理过程.

;各种病因激活凝血系统凝血酶增多

大量微血栓形成凝血因子、血小板消耗

纤溶系统激活产生纤溶酶FDP形成

纤溶、抗凝作用增强出血、休克、器官功能障碍和

溶血性贫血等;

造模原理

兔脑粉含有组织因子(或称凝血致活酶）,能启动外源性凝血过程.正常体内血液中没有组织因子，静脉注射兔脑粉后通过外源性凝血途径引起DIC.;

实验目的

学习用兔脑粉浸液复制急性实验性DIC动物模型,通过本

实验所测的几项血液学实验结果,讨论急性DIC的发病机

制，初步了解急性DIC的几项血液学常规检查方法

;

材料

家兔、兔台、常规手术器械、25%乌拉坦溶液、双孔电热恒温水浴箱、台式离心机、721分光光度计、秒表、显微镜、号码计数器、刻度离心管（10ml）、试管、刻度吸管（2ml、5ml）、微量定量移液器、血色素吸管、毛细滴管、血球计数板配盖片、橡皮吸球、乳胶滴管、棉球和纱布，3.8％枸橼酸钠溶液、4％兔脑粉生理盐水浸出液（临用时配制）、饱和氯化钠液、肝素、1％硫酸鱼精蛋白液、血小板稀释液、0.025mol／L氯化钙溶液、P试液、K试液、5ml玻璃试管、动脉夹、动脉插管

;实验步骤与观察指标

用25％乌拉坦溶液麻醉动物后，暴露一侧颈总动脉，结扎其远心端，用动脉夹夹闭近心端，剪口后插入动脉插管,结扎，固定之，备用取血。

复制DIC模型：取4％兔脑粉生理盐水溶液，按2.0ml／kg体重计算，将总量用生理盐水稀释至30m1，由耳缘静脉缓慢注入。

在注入兔脑粉浸液前15min、注入开始后15mln及45min，分别由颈总动脉取血样10ml一次,抗凝剂(3.8％枸橼酸钠溶液)与血液之比为1：9(V／V)，离心(3000转／min)15min，获得含微量血小板血浆作为大部分实验测定用。每次取血样时??采血1～2滴供血小板计数用。另用1.5—2.0m1置于不含抗凝剂的干净试管内，作为测定FDP用;检查急性DIC的几种血液学常规方法：

(1)白陶土部分凝血活酶时间(KPTT)测定．

①?取被检血浆0.2m1，加入小试管内，置37℃水浴中，然后加入0.2mlK试液,混匀后孵育3min；

②加入0.025mol/L氯化钙0.2mI，开动秒表，10s后从水浴中取出轻轻侧动，至液体流动停止或出现粗颗粒时为凝固终点。

③重复2～3次，取平均值,家兔正常值约为30sec。

⑵凝血酶原时间(PT)测定

①取被检血浆0.1ml，置于小试管内放于37℃水浴中。

②加入P试液0.2ml，开动秒表，轻轻地侧动，直至液体停止流动或出现粗颗粒，即为凝血酶原时间.

③重复3次，取平均值,家兔正常值为6～8sec。

;

⑸血清纤维蛋白(原)含量测定(饱和盐水法)

①取血浆0.5m1置于12X100mm的试管中，加入饱和氯化钠溶液4.5m1，充分混匀，置于37℃水浴中孵育3min，取血后再次混匀，用721型分光光度计比色，测定光密度.

②以生理盐水代替饱和氯化钠溶液，进行同样操作作为对照。

③对照管调零点，测出光密度(波长520mm)后，按下式计算纤维蛋白原含量：

测定管光密度

×1000=mg%

0.5;注意事项

1．兔脑粉浸液极易招致兔猝死,注射过程中，密切观察动物呼吸，控制推注速度.注射前做好二次采血的准备,以免措手不及而耽误取血。

2．纤维蛋白原含量检测时，一旦血浆与饱和盐水接触，应即混匀，否则易致局部沉淀，影响测定。

3．作3P试验，应先加血浆，再加鱼精蛋白液，否则易致假阳性。;思考题

1．本实验是否复制了急性DIC？有何根据？

2．本实验所致的DIC其主要发病机