急性肝损伤模型的建立.pptVIP

大鼠急性肝损伤的动物模型

前景目前,肝损伤动物模型的复制主要有生物性、免疫性、化学性等方法,生物学方法要求实验条件高且费用昂贵,限制了应用。免疫方法是造成免疫肝损伤,主要用于通过免疫机制而抗肝损伤的药物研究。如：卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)诱导法、刀豆蛋白A诱导法。化学方法则是通过化学性肝毒物质,如四氯化碳、氨基半乳糖、硫代乙酰胺、黄曲霉素等致肝损伤。这里我们以四氯化碳性肝损伤模型的建立来浅谈一下。

实验目的1.掌握四氯化碳对肝脏的毒性机理，成功建立其急性肝损伤模型。2.熟悉建模过程中的各个环节，并能解决相关问题，真正感受造模的过程，为将来真正进入实验做铺垫。

四氯化碳性肝损伤的机制引起氧化应激氧化应激在CCl4引发肝损伤的早期发挥着重要作用。(1)引起自由基变化;(2)引发与COX介导的炎症反应相关;(3)导致肝星形细胞活化。

2引起体内相关酶系变化(1)转氨酶上升。CCl4引发肝实质损害时,天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶活力升高,且酶活力的高低与肝细胞受损的程度相一致。(2)酶性抗氧化物改变。它们具有强烈的清除自由基的作用,且互相依赖和支持,形成网络式的抗氧化酶系统来拮抗CCl4对肝脏造成的损伤。(3)细胞色素P450酶系改变。CYP450酶在CCl4肝损伤发生过程中起到了十分重要的作用,以CYP2E1最为受到关注。

3改变细胞因子活性CCl4引发机体产生的脂质过氧化产物,如丙二醛和42羟基壬醛,可引发转化生长因子2β1、TNF2α,白细胞介素等细胞因子的高表达,后者在CCl4诱导的肝纤维化的过程中发挥着重要作用。

4引起细胞凋亡CCl4引发机体产生的自由基的代谢紊乱会引起脂质过氧化产物的积累,进而促进肝细胞的直接死亡或者凋亡。其中,羟基自由基是促使肝细胞凋亡的重要体内物质。CCl4引发肝细胞凋亡的机制复杂,一般认为都是通过激活死亡受体实现的。另外,CCl4也可引起肝星形细胞的凋亡。CCl4可激活核因子2κB,引起细胞凋亡。

建立模型方法急性肝功能衰竭模型：a.腹腔注射法：采用Wistar或SD大鼠，重200±10g，约20只大鼠。实验组：用四氯化碳(CCl4)溶于精致植物油,配成浓度为10%、20%或更高40%的四氯化碳，予3-10ml/kg分组腹腔注射给药，12～24h（更早或更晚）后处死动物。取材，检测指标。对照组：予相同剂量的精致植物油腹腔注射，余同上。b.皮下注射法：颈背部或后肢外侧皮下注射，拔针是要注意药液外漏。c.灌胃染毒法：试验前对动物隔夜禁食。

四氯化碳性肝损伤的关键点1.急性肝损伤是一个短期过程，一般在12-48h内成模，因此，分组建模、取材、标本固定的时间安排等很重要。2.腹腔注射CCl4溶液，要注意进针部位、深度。对给药浓度和剂量，因为鼠源不同或相关文献数据的不一致性，可以分组进行不同剂量、浓度的对比性实验。3.在制模过程中可以加入戊巴比妥或乙醇代替饮水，以加速肝损伤进程。