肝功能实验设计.pptVIP

肝功能实验设计;一、中英文摘要

;Abstract:

…Objective:Applicationofbiochemicaltestsofliverfunctionbechecked.

….Activity:

1.Laiimprovedmethodformeasuringserumalanineaminotransferaseammonialyase(ALT)

2.Directcolorhypochloriteammoniadetermination

3.Continuousenzymereactioncycle(liquidtwo-reagentmethod)determinationoftotalbileacid(TotalBileAcid,TBA);（1）丙氨酸氨基转移氨酶(ALT)

ALT主要存在于肝细胞浆内，其细胞内浓度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的肝细胞坏死，就可以使血清酶增高一倍,肝脏发炎时，ALT就会从肝细胞释放到血液中，因此，ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标

故测定ALT的活性，能很好反映肝功能的情况;;;2.肝功能检查测定方法的选择;;生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系;;实验结果

1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线)在坐标纸上以上表中An－A0之值为纵坐标，相应的酶活性的卡门氏单位为横坐标作图，即得赖氏法测定ALT的标准曲线

2.标本中ALT活性结果

⑴查标准曲线利用测定所得的吸光度结果(AU－AB)，便可从标准曲线上查得标本的ALT结果

⑵计算将实验测得的AU－AB、AS代入下面计算公式，即可算得标本中ALT活性

;参考值.5～25卡门氏单位

卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。可见卡门氏单位不是用物质的量浓度，而是用物质的吸光度表示酶的活性单位的。若将卡门氏单位的定义条件代入国际单位计算公式，即得卡门氏单位与国际单位的换算关系：1卡门氏单位=0.4821IU/L(25℃)，便可将卡门氏单位兑换成国际单位;评价：改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低浓度)的改良赖氏法，对卡门氏单位的科学套用，使比色法一些缺陷得到了卓有成效的克服，使其结果与速率法较为一致，能较好反映酶的真实活性，所用试剂价廉，易得，可见光比色，不需要特殊仪器，适???学生实验室操作的练习。

医院常规方法：紫外连续监测法（该法特异精密度更高，但测定成本较高，一般需要昂贵的自动生化仪）;指标2：血清的氨;实验原理:

血液离体后，立即加入定量过量的钨酸钠及硫酸溶液，使蛋白沉淀的同时，血液中的氨与硫酸形成硫酸铵而存留于血滤液中，再以酚-次氯酸钠显色后于波长630nm处测定A值（以空白校正）。;实验操作:

1.在3支试管(分别写明测定、空白、标准)中加入O．3mol／L钨酸钠溶液和0．5mol／L硫酸溶液各lmL。在测定管中加入临时抽出的血液0．5mL后立即加盖混匀，2500r／min离心5min，上清液留做测氨用。在空白管中加入0．5mL蒸馏水，标准管中加入0．5mL硫酸铵标准液，混匀，分别得到空白混合液和标准混合液

2.另取3支试管，标明测定、空白、标准。于测定管中加入上清液0．5mL，显色剂I和显色剂ⅡA各lmL，边加边混匀于空白管中加入空白混合液O．5mL，标准管中加入标准混合液0．5mL，然后在两管中加入显色剂I和显色剂ⅡB各lmL，边加边混匀。;评价：

1.本法采用两种碱浓度不同的次氯酸盐溶液分别测定标准和血液样品，保持了显色溶液酸度一致性因而提高了血却氨测定的准确度，回收率达98.5%~101.3%

2.医院常规方法：血氨常规测定方法大体分为两类，即液体试剂（谷氨酸脱氢酶法）和干化学法。以干化学法为主，但仪器昂贵，小的仪器干式仪器2～10万，大的数十万;指标3:血清总胆汁酸;操作步骤：

1.S+R1在37℃保温5分钟，加入试剂2(R2)

2.S+R1+R2在37℃保温60秒，记录吸光度值A1后，180秒后记录吸光度值A2。;计算:

ΔA标本

总胆汁酸浓度=--------------×校准液浓度