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侧翼序列热不对称PCR试题库及答案

单项选择题（每题2分，共10题）

1.热不对称PCR主要用于扩增？

A.已知序列B.侧翼序列C.编码区序列D.调控序列

答案：B

2.热不对称PCR引物设计特点不包括？

A.嵌套引物B.引物Tm差异大C.引物长度相同D.不同引物浓度不同

答案：C

3.热不对称PCR中高严谨性循环目的是？

A.提高产量B.特异性扩增C.降低背景D.延长片段

答案：B

4.以下哪种酶常用于热不对称PCR？

A.Taq酶B.反转录酶C.限制酶D.连接酶

答案：A

5.热不对称PCR循环数一般为？

A.10-15B.15-20C.20-30D.30-40

答案：D

6.热不对称PCR低严谨性循环温度一般？

A.较高B.较低C.与高严谨性相同D.随机

答案：B

7.热不对称PCR引物浓度通常？

A.相同B.随意C.嵌套引物浓度低D.嵌套引物浓度高

答案：C

8.热不对称PCR反应体系不包含？

A.dNTPB.模板DNAC.缓冲液D.抗生素

答案：D

9.热不对称PCR能扩增的侧翼序列长度一般为？

A.几十bpB.几百bpC.几千bpD.几万bp

答案：B

10.热不对称PCR技术优势不包括？

A.特异性强B.操作复杂C.效率较高D.无需已知序列两端信息

答案：B

多项选择题（每题2分，共10题）

1.热不对称PCR引物设计考虑因素有？

A.Tm值B.引物长度C.GC含量D.引物浓度

答案：ABCD

2.热不对称PCR实验成功关键因素包括？

A.引物质量B.模板完整性C.反应温度D.循环数

答案：ABCD

3.下列属于热不对称PCR应用的有？

A.基因克隆B.启动子分析C.侧翼序列获取D.蛋白质结构分析

答案：ABC

4.热不对称PCR循环过程包含？

A.变性B.退火C.延伸D.复性

答案：ABC

5.热不对称PCR所需试剂有？

A.引物B.dNTPC.酶D.缓冲液

答案：ABCD

6.热不对称PCR中影响扩增特异性因素有？

A.引物特异性B.循环参数C.模板纯度D.反应体系体积

答案：ABC

7.热不对称PCR相比传统PCR特点有？

A.更适合侧翼序列扩增B.引物设计特殊C.循环参数不同D.产物长度更长

答案：ABC

8.热不对称PCR产物分析方法有？

A.凝胶电泳B.测序C.酶切分析D.荧光定量

答案：AB

9.以下关于热不对称PCR描述正确的有？

A.可扩增未知侧翼序列B.需多个引物C.引物Tm有差异D.扩增效率高

答案：ABC

10.热不对称PCR可能遇到的问题有？

A.非特异性扩增B.引物二聚体C.扩增失败D.产物降解

答案：ABCD

判断题（每题2分，共10题）

1.热不对称PCR不需要引物。（×）

2.热不对称PCR中所有引物Tm值相同。（×）

3.热不对称PCR只能扩增已知序列。（×）

4.热不对称PCR循环数越多越好。（×）

5.热不对称PCR引物浓度差异对扩增无影响。（×）

6.热不对称PCR反应体系不需要模板DNA。（×）

7.高严谨性循环利于提高扩增特异性。（√）

8.热不对称PCR产物只能通过凝胶电泳检测。（×）

9.热不对称PCR技术操作简单。（√）

10.热不对称PCR可用于基因功能研究。（√）

简答题（每题5分，共4题）

1.简述热不对称PCR原理

利用不同引物Tm值差异，通过高低严谨性循环，使特异引物与模板退火并延伸，扩增侧翼序列。高严谨性循环保证特异性，低严谨性循环增加引物与模板结合机会。

2.热不对称PCR引物设计原则

引物Tm值要有差异，通常嵌套引物Tm高。考虑引物长度、GC含量，保证特异性，不同引物浓度不同，一般嵌套引物浓度低。

3.热不对称PCR实验注意事项

保证引物质量和特异性，模板要完整、纯度高。精确控制反应温度和循环数，防止非特异性扩增和引物二聚体产生，注意反应体系各成分比例。

4.热不对称PCR应用领域

用于基因克隆获取未知侧翼序列，进行启动子分析，有助于研究基因表达调控，也