CN110869496A 用于大麻素家族的戊烯化聚酮的重组生产系统 （海湾医学公司）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(43)申请公

(10)申请公布号CN110869496A布日2020.03.06

(21)申请号201880042070.X

(22)申请日2018.05.10

(30)优先权数据

62/504,4562017.05.10US

(85)PCT国际申请进入国家阶段日2019.12.23

(86)PCT国际申请的申请数据

PCT/US2018/0321552018.05.10

(87)PCT国际申请的公布数据

WO2018/209143EN2018.11.15

(71)申请人海湾医学公司地址美国内华达州

(72)发明人P·J·巴尔C·K·马洛

(74)专利代理机构北京市金杜律师事务所

11256

代理人陈文平徐志明

(51)Int.CI.

C12N9/10(2006.01)

C12N9/12(2006.01)

C12N9/88(2006.01)

C12N15/52(2006.01)

C12N15/81(2006.01)

C12P5/00(2006.01)

孙建萍

权利要求书4页说明书23页附图5页

(54)发明名称

用于大麻素家族的戊烯化聚酮的重组生产系统

(57)摘要

CN110869496A

CN110869496A

CN110869496A权利要求书1/4页

2

1.一种生产大麻素产物的方法，该方法包括在其中表达由外源多核苷酸编码的产物并产生2-烷基-4,6-二羟基苯甲酸的条件下，培养修饰的重组宿主细胞，所述细胞包含：

(i)编码将脂族羧酸转化成酰基CoA硫酯的酰基-CoA合成酶的第一外源多核苷酸；

(ii)编码从酰基CoA硫酯和丙二酰CoA产生四酮的二羟基戊基苯甲酸合酶的第二外源多核苷酸；

(iii)编码2-烷基-4.6-二羟基苯甲酸环化酶的第三外源多核苷酸；和

将2-烷基-4,6-二羟基苯甲酸在体外转化成大麻素产物。

2.权利要求1的方法，其中所述2-烷基-4,6-二羟基苯甲酸环化酶是二羟基戊基苯甲酸环化酶。

3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述2-烷基-4,6-二羟基苯甲酸是二羟基戊基苯甲酸。

4.权利要求1、2或3的方法，其中所述酰基-CoA合成酶是revS多肽或CsAAE3多肽。

5.权利要求1至4任一项的方法，其中所述2-烷基-4,6-二羟基苯甲酸环化酶包含DABB结构域。

6.权利要求1至5任一项的方法，其中所述第二和第三外源多核苷酸作为双顺反子mRNA表达。

7.权利要求3的方法，其中所述转化步骤包括形成包含二羟基戊基苯甲酸、香叶醇和有机溶剂的反应混合物并将所述反应混合物维持在足以产生大麻萜酚酸(CBGA)的条件下。

8.权利要求7的方法，其中所述反应混合物进一步包含酸。

9.权利要求8的方法，其中所述酸是对甲苯磺酸。

10.权利要求7-9任一项的方法，其中所述有机溶剂是甲苯。

11.权利要求7-10任一项的方法，其中所述反应混合物包含所述宿主细胞。

12.权利要求1-11任一项的方法，其中所述修饰的重组宿主细胞是经遗传修饰以敲除PAD1和FDC1芳族脱羧酶基因表达的酵母细胞。

13.权利要求1-11任一项的方法，其中所述2-烷基-4,6-二羟基苯甲酸是所述大麻素产物。

14.权利要求1-11任一项的方法，进一步包括将所述2-烷基-4,6-二羟基苯甲酸转化成所述大麻素产物。

15.一种修饰的重组宿主细胞，其包含：(i)编码将脂族羧酸转化成酰基CoA硫酯的酰基-CoA合成酶的第一外源多核苷酸，其中所述酰基-CoA合成酶是revS多肽或CsAAE3多肽；(ii)编码二羟基戊基苯甲酸合酶的第二外源多核苷酸；和(iii)编码2-烷基-4.6-二羟基苯甲酸环化酶的第三外源多核苷酸。

16.权利要求15的修饰重组宿主细胞，其中所述2-烷基-4,6-二羟基苯甲酸环化酶是截短的二羟基戊基苯甲酸环化酶。

17.权利要求15的修饰重组宿主细胞，包含编码异戊烯基转移酶的第四外源多核苷酸，所述异戊烯基转移酶催化香叶基-焦磷酸与2-烷基-4,6-二羟基苯甲酸的偶联以产生酸性大麻素。

18.权利要求15的修饰重组宿主细胞，其中所述第一、第二或第三外源多核苷酸中的一个或多个存在于自主复制表达载体中。

CN1108694