CN111778311A 一种工业大麻根系土壤检测用微生物提取方法 （东北林业大学）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN111778311A

(43)申请公布日2020.10.16

(21)申请号202010672328.3

(22)申请日2020.07.14

(71)申请人东北林业大学

地址150040黑龙江省哈尔滨市香坊区和

兴路26号

申请人黑龙江省农业科学院大庆分院

(72)发明人郭丽李泽宇陈祥伟王明泽车野张玲姜泽宇接思源

王迪刘冰马兰

(74)专利代理机构西安汇恩知识产权代理事务所(普通合伙)61244

代理人张燕

(51)Int.CI.

C12Q1/24(2006.01)

权利要求书1页说明书4页

(54)发明名称

一种工业大麻根系土壤检测用微生物提取方法

(57)摘要

CN111778311A本发明公开了一种工业大麻根系土壤检测用微生物提取方法，通过土壤取样装置取出同一处工业大麻植物根系处的土壤样品两份，两份工业大麻植物根系处的土壤样品分别用玻璃瓶盛装，两份土壤样品量一样，一份用作土壤微生物量测定，一份作土壤微生物提取，第一份土壤样品经过蒸熏处理测定后微生物量符合标准后，再通过第二份土壤样品进行微生物的提取。本发明具有提取土壤微生物前先对土壤中的微生物含

CN111778311A

CN111778311A权利要求书1/1页

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1.一种工业大麻根系土壤检测用微生物提取方法，其特征在于：通过土壤取样装置取出同一处工业大麻植物根系处的土壤样品两份，第一份土壤样品经过蒸熏处理测定后微生物量符合标准后，再通过第二份土壤样品进行微生物的提取。

2.根据权利要求1所述的一种工业大麻根系土壤检测用微生物提取方法，其特征在于：两份工业大麻植物根系处的土壤样品分别用玻璃瓶盛装，两份土壤样品量一样，一份用作土壤微生物量测定，一份作土壤微生物提取。

3.根据权利要求1所述的一种工业大麻根系土壤检测用微生物提取方法，其特征在于：土壤微生物含量测定流程：

S1、将取出的一份土壤样品进行前处理，并分成等量的四份，将处理后的一份土壤样品放入蒸熏装置内进行蒸熏处理，通过蒸熏将土壤中微生物杀死；熏蒸开始的同时，另取剩下的三份土壤于聚乙烯塑料瓶中，直接加入KSO4提取，另作三个土壤样品；

S2、将蒸熏处理后的土壤无损地转移到聚乙烯塑料瓶中，加入的KSO4,将聚乙烯塑料瓶通过振荡机振荡，再用中速定量滤纸过滤在塑料瓶中；

S3、吸取上述土壤提取液于消化管中，准确加入H2S04溶液，加入两个玻璃珠，混匀后置于磷酸浴中煮沸，冷却后将溶液无损地转移至三角瓶中，用去离子水洗涤消化管使溶液体积约为，加入一滴邻菲罗啉指示剂，用硫酸亚铁标准溶液滴定，溶液颜色由橙黄色变为蓝色，再变为红棕色，即为滴定终点；

S4、根据相应的计算公式，被杀死的微生物体被新加人原土样的微生物分解而放出CO2,根据释放出的CO2的量和微生物体矿化率常数Kc可计算出该土样微生物中的碳量。

4.根据权利要求1所述的一种工业大麻根系土壤检测用微生物提取方法，其特征在于：

土壤微生物提取方法：

S1、称取第二份土壤样品，与DNA提取液一起加入瓶中放置在摇床上摇动；

S2、接着加入20%SDS在水浴加热设备中加热，每隔20分钟轻微晃动瓶子，晃动瓶子时注意不要烫到手；

S3、水浴加热后，将瓶子放置在离心机上离心，收集上清液，转移到离心管中；土壤沉淀再加入DNA提取液和20%的SDS,通过摇床摇晃，在水浴加热设备中加热，在离心机上离心，收集上清液与上次的上清液合并；再进行一侧上述操作，收集到的上清液与前两次上清液合并；

S4、收集到的上清液与等体积的氯仿异戊醇混合液24:1混合，混合后经过离心机离心，吸取水相转移至另一个离心管中，以0.6倍体积的异丙醇作为添加液沉淀，经过离心机离心，收集核酸沉淀，用冷的70%乙醇洗涤沉淀，溶于TE溶液中；

S5、通过上述方法可以的提取处第二份土壤中的微生物。

CN111778311A说明书1/4页

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一种工业大麻根系土壤检测用微生物提取方法

技术领域

[0001]本发明涉及土壤检测用微生物提取技术领域，具体为一种工业大麻根系土壤检测用微生物提取方法。

背景技术

[0002]工业大麻是深耕作物，为直根系，侧