CN111087474A 一种基于大麻肽(r)VD-Hpα和神经肽FF的嵌合肽及其制备方法与应用 （兰州大学）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(43)申请公

(10)申请公布号CN111087474A布日2020.05.01

(21)申请号201911323745.0

(22)申请日2019.12.20

(71)申请人兰州大学

A61K38/08(2019.01)

A61P29/00(2006.01)

地址730000甘肃省兰州市城关区天水南

路222号

(72)发明人方泉许彪张梦娜张润李宁

(74)专利代理机构江苏圣典律师事务所32237代理人胡建华

(51)Int.CI.

CO7K19/00(2006.01)

CO7K1/36(2006.01)

CO7K1/16(2006.01)

CO7K1/34(2006.01)

CO7K1/04(2006.01)

CO7K1/06(2006.01)

权利要求书1页说明书9页附图4页

(54)发明名称

一种基于大麻肽(r)VD-Hpα和神经肽FF的嵌合肽及其制备方法与应用

(57)摘要

本发明公开了一种基于大麻肽(r)VD-Hpa

CN111087474A和神经肽FF的嵌合肽及其制备方法与应用，即基于(r)VD-Hpa的N末端序列与神经肽FF的C末端序列构建而成的全新嵌合肽VF-11和VF-13。与现有技术相比，本发明具有如下优势：(1)与已报道的(r)VD-Hpα及(m)VD-Hpα相比，VF-11和VF-13在体内的镇痛活性有所加强，产生了比母体分子更有效的镇痛效果。(2)VF-11和VF-13解决了经典大麻类激动剂以及母体分子存在的镇痛耐受

CN111087474A

镇

镇痛效应(%MPE)

时间(分钟)

CN111087474A权利要求书1/1页

2

1.一种基于大麻肽(r)VD-Hpa和神经肽FF的嵌合肽，其特征在于，其具有式I所示的氨基酸序列，

Val-Asp-Pro-Val-Asn-Phe-Lys-Phe-Leu-Xaa10-Xaal1-Arg-Phe-NH?(I);

其中，Xaa10和Xaal1同时缺失，或Xaa10被Pro取代的同时Xaal1被Gln取代。

2.根据权利要求1所述的嵌合肽，其特征在于，其具有式Ⅱ所示的氨基酸序列；Val-Asp-Pro-Val-Asn-Phe-Lys-Phe-Leu-Arg-Phe-NH?(Ⅱ)。

3.根据权利要求1所述的嵌合肽，其特征在于，其具有式Ⅲ所示的氨基酸序列；Val-Asp-Pro-Val-Asn-Phe-Lys-Phe-Leu-Pro-Gln-Arg-Phe-NH?(Ⅲ)。

4.权利要求1所述嵌合肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)采用Fmoc固相合成法制备多肽：先溶胀氨基树脂，抽干，洗涤并脱保护后，将第一个N-α-Fmoc保护的氨基酸与脱保护后的氨基树脂进行缩合反应，茚检确认缩合成功，再脱保护并洗涤，茚检确认脱保护完全；然后缩合第二个氨基酸，重复以上步骤，由C端向N端，直至多肽链合成完成；

(2)用切割剂将步骤(1)合成完成的多肽链进行切割，过滤，将滤液旋干，加入冰乙醚析出沉淀，萃取获得粗肽，并通过液相色谱进一步纯化，得到多肽产品。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的氨基树脂为Rink-Amide-MBHA或Rink-Amide树脂；所述的溶胀为将氨基树脂置于二氯甲烷中，使树脂充分溶胀；二氯甲烷与氨基树脂的体积质量比为8～12mL/g。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的脱保护为将处理后的氨基树脂置于混合溶液中，一次搅拌，重复1～4次，抽干；再置于混合溶液中，二次搅拌，洗涤；

其中，所述的混合溶液为哌啶、1,8-二氮杂环[5,4,0]十一碳-7-烯与N,N-二甲基甲酰胺的混合溶液，三者的体积比为1:1:98;混合溶液与脱保护的氨基树脂的体积质量比为8~12mL/g;一次搅拌的速率为60～100rpm,一次搅拌的时间为2～6min;二次搅拌的速率为60~100rpm,二次搅拌的时间为8～12min。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的缩合反应为将N-