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粪大肠杆菌的测定——多管发酵法
多管发酵法一.方法简介二.实验仪器1.上海跃进生化培养箱SPX-802.全自动立式压力蒸汽灭菌器?YXQ-LS-50SⅡ三.操作流程
粪大肠菌群的测定有什么意义呢？水中含有的细菌总数与水污染状况有一定关系，但是不能直接说明是否有病原微生物存在。粪便污染指示剂指的是如有该指示菌存在于水体中，表示曾有过粪便污染，也就有可能存在肠道病原微生物。那么该水质在卫生学上是不安全的。常见的指示菌有：总大肠菌群、粪大肠菌群、粪链球菌、产气荚膜梭菌等。我们实验室以粪大肠菌群作为指示细菌。
上海跃进生化培养箱SPX-80一.用途概述??适用于环境环保、卫生防疫药检、农畜、水产等科研院校生产部门。是水体水析和BOD测定，细菌、霉菌、?微生物的培养、保存、植物栽培、育种试验的专用恒温设备。二.仪器参数容积（L）?：80?工作电压：220V/50HZ?额定功率(kw)?≤300控温范围(℃)?5~50?温度波动度(℃)?≤±1?控温精度(℃)?≤±0.5?工作室尺寸?：300x480x550
全自动立式压力蒸汽灭菌器YXQ-LS-50SⅡ一.技术参数灭菌器容积：50L;?控温范围：109℃~135℃；?电源电压：交流220V±10%，50HZ±1%；??加热器功率：3200VA；3500VA；?工作最高压力：0.212MPa；温度：135℃；?环境温度：5℃-40℃；相对湿度≤80%RH二.操作步骤1.堆放灭菌物品2.密封容器3.开始加热4.进行灭菌操作
乳糖蛋白胨培养液蛋白胨10g牛肉浸膏3g乳糖5g氯化钠5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml100ML蒸馏水溶解，调节PH7.2~7.4，再加入1ml1.6%溴甲酚紫乙醇溶液高压灭菌锅115度
EC培养液胰胨10g酵母浸膏3g乳糖12.5g氯化钠5g胆盐三号1.5g1%苯胺蓝水溶液10ml1%玫瑰色酸溶液10ml100ML蒸馏水溶解，调节PH7.2~7.4，于115度灭菌15分钟，放入冰箱中备用，使用前分别加入1ml1%苯胺蓝水溶液和1%玫瑰色酸溶液
2.初发酵试验将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在37℃±0.5℃下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。3复发酵试验轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用3mm接种环或灭菌棒将培养物转接到EC培养液中。在44.5℃±0.5℃温度下培养24h±2h（水浴箱的水面应高于试管中培养基液面）。接种后所有发酵管必须在30min内放进水浴中。培养后立即观察，发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。4、结果的计算根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从表3中查得每升水样中的粪大肠菌群。
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