EBER原位杂交检测技术专家共识解读（2025）.pptxVIP

EBER原位杂交检测技术专家共识解读（2025）精准检测，助力临床诊断

目录第一章第二章第三章技术原理与临床意义EBER的生物学特性样本处理规范

目录第四章第五章第六章组织处理关键技术检测流程质控CAEBVD诊断应用

技术原理与临床意义1.

原位杂交技术基本原理利用已知碱基序列的核酸探针与组织/细胞中的靶核酸特异性结合，通过碱基互补配对原则实现精准定位，探针可标记荧光素、酶或放射性同位素。核酸互补配对杂交后通过组织化学或免疫组化法显色，在显微镜下形成可见信号（如DAB显色或荧光），保留组织形态学结构的同时显示核酸分布。信号可视化探针需严格匹配EBERRNA序列，避免与非靶序列交叉反应，通过优化杂交温度、盐浓度等参数确保结果准确性。高特异性设计

潜伏期高表达EBER是EB病毒编码的小核RNA（EBER-1/2），在潜伏感染期大量转录，每个感染细胞可达10^7拷贝，远高于病毒DNA拷贝数。感染状态鉴别EBER阳性提示病毒潜伏感染，与裂解期抗原（如EA、VCA）检测互补，可区分病毒活跃复制与潜伏状态。细胞定位明确杂交信号定位于细胞核，与组织病理学特征结合可判断感染细胞类型（如淋巴细胞、上皮细胞）。广谱适用性适用于福尔马林固定石蜡包埋样本，兼容存档病理标本的回顾性研究BER在EBV潜伏感染中的标志作用

要点三鼻咽癌鉴别诊断2024CSCO指南推荐EBER检测用于不典型鼻咽癌病理确诊，阳性率超90%，显著优于血清学检测。要点一要点二淋巴瘤分型依据EBV阳性弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）需通过EBER确诊，该亚型对R-CHOP方案反应差，需调整治疗策略。胃癌预后评估EBV阳性胃癌占全球胃癌8.9%，具有独特分子特征（PD-L1高表达、淋巴细胞浸润），提示更好的生存预后和免疫治疗潜力。要点三肿瘤诊断中的金标准价值

EBER的生物学特性2.

核定位信号EBER分子含有特定的核定位序列，使其在感染细胞中主要定位于核内，与宿主细胞核蛋白（如La蛋白、EAP蛋白）相互作用，参与病毒潜伏期的维持。非编码RNA结构EBER-1和EBER-2是EB病毒编码的短链非编码RNA，长度分别为167和172个核苷酸，具有高度保守的二级结构，通过茎环结构形成稳定的核糖核蛋白复合物。功能差异EBER-1与核仁组织区结合可能影响rRNA加工，而EBER-2更倾向于调控宿主免疫应答，两者协同作用促进病毒持续感染。EBER1/EBER2分子结构

EBER在EBV潜伏感染期表达量极高，单个感染细胞内可达数百万拷贝，远超病毒其他基因表达水平，使其成为病理诊断的理想靶标。病毒潜伏期标志EBER的高表达依赖宿主RNA聚合酶III系统，其启动子区域含有保守的A盒和B盒序列，确保高效持续转录。RNA聚合酶III依赖性转录EBER通过5端三磷酸化和3端尿苷酸化修饰抵抗外切酶降解，半衰期长达24小时以上，在福尔马林固定组织中仍可稳定检出。稳定性机制高拷贝特性使EBER原位杂交的灵敏度显著优于病毒DNA检测方法（如PCR），尤其适用于低病毒载量的样本分析。临床检测优势高拷贝数特征（10?-10?/细胞）

EBER可被包装进外泌体分泌至微环境，通过旁分泌方式影响未感染细胞的表观遗传修饰（如DNA甲基化），参与肿瘤微环境重塑。外泌体介导传播EBER通过结合PKR（双链RNA依赖的蛋白激酶），阻断其激活下游eIF2α磷酸化，抑制干扰素抗病毒效应，促进病毒免疫逃逸。干扰素通路拮抗EBER上调BCL-2等抗凋亡蛋白表达，同时抑制Fas介导的凋亡途径，延长感染细胞存活时间，为病毒潜伏感染提供微环境。凋亡调控作用抑制干扰素与抗凋亡机制

样本处理规范3.

细胞学标本固定（10%中性福尔马林）细胞学标本应在采集后30分钟内完成固定，固定时间严格控制在6-24小时范围内，避免过度固定导致核酸降解。固定时间控制固定液与标本体积比应≥10:1，确保标本完全浸没，容器选择以50ml离心管为宜。固定液体积比例固定过程需在室温（18-25℃）下进行，定期检测固定液pH值维持在7.2-7.4区间。温度与pH值要求

组织离体快速固定（≤60分钟）超过60分钟未固定的组织会出现自溶现象，EBERRNA与核蛋白分离，导致探针结合位点丢失。手术室应配备标准化固定设备实现即时固定。时间敏感性固定过程需保持室温（20-25℃），高温加速RNA水解，低温影响固定液渗透速率。特殊标本（如骨髓）需采用预冷固定液延缓酶解。温度控制

VS蜡块中RNA随时间缓慢降解，2年以上保存的标本EBER信号强度下降30%-50%，建议优先使用新鲜蜡块。长期保存需密封防潮，-20℃可延长稳定性。重复切片导致蜡块暴露，加速氧化降解。建议首次切片后真空密封保存，避免反复冻融。质控标准建立每批次检测需设立阳性对照蜡块（已知EBER+的