CN112795495B 利用酿酒酵母生产异源大麻环萜酚的方法 （大连理工大学）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利

(45)授权

(10)授权公告号CN112795495B公告日2021.10.26

(21)申请号202011475558.7

(22)申请日2020.12.14

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN112795495A

(43)申请公布日2021.05.14

(73)专利权人大连理工大学

地址116024辽宁省大连市高新园区凌工

路2号

专利权人大连理工大学宁波研究院

(72)发明人薛闯齐明明

(74)专利代理机构大连东方专利代理有限责任公司21212

代理人周媛媛李馨

(51)Int.CI.

C12N1/19(2006.01)

C12N15/52(2006.01)

C12N15/53(2006.01)

C12N15/54(2006.01)

C12N15/60(2006.01)

C12N15/61(2006.01)

C12P17/06(2006.01)

C12R1/865(2006.01)

(56)对比文件

CN110892075A,2020.03.17

WO2019071000A1,2019.04.11

WO2019071000A1,2019.04.11

CN110914416A,2020.03.24

CN107075523A,2017.08.18

CN110892075A,2020.03.17

XiaozhouLuo等.Completebiosynthesis

ofcannabinoidsandtheirunnatural

analoguesinyeast.《Nature》.2019,第567卷

AngelaCarvalho等.Designing

microorganismsforheterologous

biosynthesisofcannabinoids.《FEMSYeastResearch》.2017,第17卷

陈璇等.大麻植物中大麻素成分研究进展.《植物学报》.2011,第46卷(第2期),

审查员蔡玉品

权利要求书3页说明书8页序列表16页附图2页

(54)发明名称

利用酿酒酵母生产异源大麻环萜酚的方法

(57)摘要

CN112795495B本发明公开了一种能够生物合成大麻环萜酚酸的重组宿主细胞及其构建方法以及通过重组宿主细胞生物合成大麻环萜酚酸的方法，属于生物技术与医药领域。本发明以酿酒酵母为宿主，首先在宿主中过表达大麻萜酸合酶和大麻环萜酚酸合酶，然后在宿主中构建利用糖类合成大麻环萜酚酸的前体化合物橄榄醇酸的代谢途径，进一步在宿主中构建己酸到橄榄醇酸代谢途径，最后优化宿主内源甲羟戊酸途径和乙酰辅酶A的代谢途径，获得能够生物合成大麻环萜酚酸的重

CN112795495B

CN112795495B权利要求书1/3页

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1.一种能够合成大麻环萜酚酸的重组酿酒酵母，其特征在于，所述重组酿酒酵母菌株异源表达大麻萜酸合酶基因和大麻环萜酚酸合酶基因；

所述重组酿酒酵母异源表达β-酮硫醇酶基因、3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶基因、巴豆酸酶基因、反式-2-烯酰辅酶A还原酶基因、大麻聚酮合酶基因和橄榄酸环化酶基因；

所述重组酿酒酵母异源表达酰基活化酶基因和乙酰辅酶A羧化酶基因；

所述重组酿酒酵母过表达截短的HMG-辅酶A还原酶基因、乙酰辅酶A乙酰基转移酶基因、羟甲基戊二酸辅酶A合成酶基因、香叶基二磷酸合成酶基因、甲羟戊酸激酶基因ERG12、甲羟戊酸激酶基因ERG8、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因和异戊烯基焦磷酸异构酶基因；

所述重组酿酒酵母过表达乙醛脱氢酶基因、乙酰辅酶A合成酶基因和乙醇脱氢酶基因；

所述大麻萜酸合酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，大麻环萜酚酸合酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，β-酮硫醇酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示，3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，巴豆酸酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示，反式-2-烯酰辅酶A还原酶基因的核苷酸序