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美拉德反应初始阶段的测定
一、实验原理麦拉德反应即羰氨反应,是蛋白质、氨基酸或胺与碳水化合物之间的反应。麦拉德反应开始,以无紫外吸收的无色溶液为特征。还原能力强,随着反应的不断进行,溶液变成黄色,在近紫外区吸收增大,同时还有少量糖脱水生成5-羟甲基糖醛(HMF),以及发生键断裂形成二羰基化合物和色素的初产物,最后生成类黑精色素。本实验利用模拟实验:即葡萄糖与甘氨酸在一定pH缓冲液中加热反应,一定时间后测定HMF在285nm波长处的紫外消光值。
二、仪器和试剂1.仪器:紫外分光光度计、水浴锅、7支试管、7支试管夹、标签纸、4支2mL移液管、3支5mL移液管、2个小烧杯、玻璃棒、洗耳球、pH试纸、试管架、5个试剂瓶。
2.试剂:0.5mol/L葡萄糖溶液。9.9g葡萄糖溶解于100mL蒸馏水中。0.5mol/L蔗糖溶液。17.1g蔗糖溶解于100mL蒸馏水中。0.1mol/L甘氨酸溶液。0.75g甘氨酸溶解于100mL蒸馏水中。0.1mol/L氢氧化钠溶液。4g氢氧化钠溶解于1000mL蒸馏水中。0.1mol/L盐酸溶液。8mL浓盐酸溶解于1000mL蒸馏水中。2%亚硫酸钠溶液。5g亚硫酸钠溶解于250mL蒸馏水中。
三、操作步骤取7支洁净干燥的试管,依次编号为A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7。按照下表配制溶液,混匀。并用玻璃棒蘸取少许A1、A2、A3溶液于pH试纸上,记录测得的pH值。除A4以外,其余6支试管置于90℃恒温水浴锅中加热。40min后,取出A1、A2、A3,冷却后测得A1、A2、A3、A4在285nm处的紫外吸收值。A5、A6、A7继续加热,再过50min,取出A5、A6、A7,记录试管内溶液颜色的变化。分析反应物、pH值、温度及褐变抑制剂对麦拉德反应的影响。
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