2。2动物细胞工程.pptVIP

第二节动物细胞工程;一、动物细胞培养的概念：;3.动物细胞培养的条件:;动物细胞培养的过程：;原代培养;强调一：细胞贴壁过程;■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。;细胞株：传代细胞一般能传到40-50代，遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。;获得细胞;1、定义：指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。;

;2、诱导融合的因素

生物法：灭活的病毒诱导融合.(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。)

化学法：聚乙二醇PEG诱导融合.

物理法：电刺激融合;3、动物细胞融合技术的应用;思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？;人们获得抗体的传统方法是?

将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体

这种方法的缺点是什么?

效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。

运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？

能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？

B淋巴细胞在体外不能无限增殖。;单克隆抗体的制备—极富创造性的方案

将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。

米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。;杂交细胞;动物特异性免疫

分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn）

细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG）

第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）

第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞??并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。

选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。

提取单克隆抗体。;3）、为何要进行两次筛选？;1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点.

2、用于治疗疾病和运载药物：

主要用于癌症治疗。

生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）

;三、动物体细胞核移植技术和克隆动物;4、体细胞核移植过程---示动物克隆---无性繁殖;核移植流程:;5.动物细胞培养技术的应用:;;[例题2]

（1）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，

将抗原注射到小鼠体内，可获得(多选)（）

A．T淋巴细胞B．效应B淋巴细胞

C．抗体D．记忆细胞

（2）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，

正确的是(多选)（）

A．B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台

病毒或聚乙二醇诱导

B．融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克

隆抗体

C．体外培养时，一个B淋巴细胞可以产生一种抗体，但不

能无限增殖

D．单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，

优越性明显;B;1.动物细胞工程技术的基础是：（）

A．动物细胞融合

B．胚胎移植

C．动物细胞培养

D．核移植;２．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）

A．结果是相同的

B．杂种细胞的形成过程基本相同

C．操作过程中酶的作用相同

D．诱导融合的手段相同

;３.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞

诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，

在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）

①淋巴细胞

②小鼠骨髓瘤细胞

③B淋巴细胞自身融合细胞

④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞

⑤杂交瘤细胞

A．②④B．①③⑤

C．①②③④D．②③