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实训二微生物实验常用灭菌和消毒方法

好的，我们来探讨一下微生物实验中常用的灭菌与消毒方法。在微生物学研究中，无菌观念和操作是实验成功的基石。无论是培养纯培养物，还是进行微生物的分离、鉴定，都必须首先确保实验环境、所用器皿、培养基以及操作者自身的无菌状态，以避免杂菌污染，保证实验结果的准确性和可靠性。因此，熟练掌握并正确应用各种灭菌和消毒技术，是每一位进入微生物实验室的人员必须具备的基本技能。

一、基本概念：灭菌与消毒的区别

在深入具体方法之前，我们首先需要明确两个核心概念：灭菌和消毒。

*灭菌（Sterilization）：指采用强烈的理化因素，使物体内外所有的微生物，包括细菌的芽孢、真菌的孢子等，全部杀死或永久丧失其活力的过程。经过灭菌的物品称为“无菌物品”。

*消毒（Disinfection）：指用物理或化学方法杀死物体表面或环境中的病原微生物，但不一定能杀死全部非病原微生物（如芽孢）的过程。消毒的目的是防止病原微生物的传播。

简而言之，灭菌是“斩草除根”，消毒是“控制危害”。在微生物实验中，培养基、接种工具、培养容器等通常需要灭菌；而实验台面、操作者的手、实验室内空气等则需要消毒处理。

二、常用灭菌方法

（一）物理灭菌法

物理灭菌法是利用物理因素（如热力、辐射、过滤等）作用于微生物，达到灭菌目的。

1.热力灭菌法：这是应用最广泛、效果最可靠的灭菌方法。其原理是利用高温使微生物的蛋白质和核酸变性，从而导致微生物死亡。

*干热灭菌法：

*原理：通过空气传导热量，使微生物脱水、蛋白质变性凝固而死亡。

*常用方法与对象：

*烘箱热空气灭菌：适用于玻璃器皿（如培养皿、试管、吸管等）、金属器械（如接种环、剪刀、镊子等）和一些不允许潮湿的物品。通常在特定温度下维持一定时间，以确保灭菌效果。灭菌时，物品需洗净干燥，摆放时留有空隙，以利于热空气流通。

*灼烧灭菌：接种环、接种针等在火焰上直接灼烧，是最简单、最彻底的灭菌方法。试管口、瓶口在火焰上快速通过几次，也可达到灭菌（实际上是消毒）目的，防止管口污染。

*湿热灭菌法：

*原理：利用饱和水蒸气的潜热使蛋白质变性。水蒸气穿透力强，能更有效地杀死微生物，尤其是芽孢。在同一温度下，湿热灭菌效果优于干热灭菌。

*常用方法与对象：

*高压蒸汽灭菌：这是微生物实验室中最常用的灭菌方法，适用于培养基、生理盐水、缓冲液、工作服、玻璃器皿（需用布或纸包裹）等。常用的条件是在特定压力下，温度达到一定值，维持一定时间。操作时需注意排尽灭菌锅内冷空气，以保证锅内温度均匀一致。灭菌结束后，需缓慢降压，避免液体暴沸。

*煮沸消毒：将物品置于沸水中煮沸一段时间，可杀死细菌繁殖体，但对芽孢的杀灭效果较差。常用于注射器、手术器械等的初步消毒，或不耐高温物品的消毒。若在水中加入少量碳酸钠，可提高沸点，增强灭菌效果，并能防止金属器械生锈。

2.辐射灭菌法：

*紫外线灭菌：紫外线主要作用于微生物的核酸，使其形成胸腺嘧啶二聚体，干扰DNA复制，导致微生物死亡。适用于空气、物体表面的灭菌，如超净工作台、接种室、培养室的空气及台面消毒。紫外线穿透力弱，不能穿透玻璃、纸张、衣物等，因此只能用于表面消毒。使用时需注意保护眼睛和皮肤，避免直接照射。

*（此处省略其他辐射灭菌方法，因不常用或有特定限制）

3.过滤除菌法：

*原理：利用滤膜的微孔截留液体或气体中的微生物，从而达到除菌目的。

*适用对象：适用于一些不耐热的液体（如酶溶液、血清、维生素溶液等）和气体的除菌。滤膜的孔径需选择合适，以确保能有效截留所需去除的微生物。操作时需注意滤器和滤膜的无菌处理，以及过滤过程的无菌操作。

（二）化学灭菌法

化学灭菌法是利用化学药物抑制或杀死微生物的方法。

*气体灭菌：如环氧乙烷，穿透力强，杀菌谱广，适用于不耐热、不耐湿物品的灭菌，但因其易燃易爆且有毒性，操作要求较高，实验室中不常用。

三、常用消毒方法

消毒主要侧重于杀灭或清除环境中的病原微生物，以防止其传播和感染。

（一）物理消毒法：

如上述的煮沸消毒、紫外线消毒（对空气和表面而言也常作为消毒手段）。

（二）化学消毒法：

利用各种化学消毒剂进行消毒。选择消毒剂时需考虑其杀菌谱、杀菌力、作用速度、稳定性、对物品的腐蚀性、有无毒性及刺激性等。

*醇类：最常用的是75%乙醇，能迅速杀灭细菌繁殖体，但对芽孢无效。常用于皮肤、器械、工作台面的消毒。过高浓度的乙醇会使菌体蛋白迅速凝固，影响其渗透，反而降低杀菌效果。

*含氯消毒剂：如漂白粉、次氯酸钠等，具有广谱杀菌作用，对细菌繁殖体、芽孢、病毒等均有杀灭作用。常用于地面、墙壁、排泄物的消毒。使用时需注意现配现用，避免与酸性物质混合，以防