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第六章植物胚胎培养及离体授粉;;植物胚胎培养（EmbryoCulture）概念:

指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植物的技术。包括胚培养（成熟胚培养、幼胚培养）、胚珠培养、子房培养、胚乳培养、试管受精等类型。1904年Hanning最早成功培养萝卜和辣根的胚。;台湾红豆杉成熟胚培养;牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖

Matureembryocultureandrapidpropagationoftreepeony;成熟胚培养过程---以玉米成熟胚培养为例;2、幼胚培养

对发育早期的胚进行培养。培养技术和条件要求较高。;;培养基与培养条件;2、碳水化合物：

糖的作用：

调节渗透压；碳源；防止幼胚早萌。

渗透压的保持对于幼胚培养相当重要。最适蔗糖浓度随着胚的发育时期而降低。

;胚发育早期要求较高的的渗透压，而随着胚的发育逐渐降低。;;3、植物激素的作用：

成熟胚一般不需要外源激素即可萌发。但激素能促进休眠胚的萌发。

幼胚需要外源激素，应保持外源激素与内源激素的平衡。过低则不能促进生长，过高则易导致幼胚脱分化形成愈伤。;4、天然提取物及某些蛋白制品；

银杏幼胚培养中添加银杏胚乳有促进作用（1934）；曼佗罗幼胚培养中发现添加椰子乳能很好的促进幼胚的发育(200-500um的幼胚)（1941）。

此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母提取物、水解酪蛋白等都能促进幼胚的发育。;（二）环境条件

1、温度：

多数为25-30℃，因植物种类有所差别。

2、光照：

一般认为黑暗或弱光条件较为合适。

;（三）胚柄

在幼胚培养中，带有胚柄结构有利于幼胚的生长。但一般较难与胚一起分离出来。

;植物胚胎发生过程：

原胚－球形胚－心型胚－鱼雷胚－子叶胚

;;;

;胚乳在被子植物中是双受精的产物，由极核和雄配子结合成的三倍体组织。

而裸子植物胚乳在受精前形成，为单倍体。

仅40多种植物进行胚乳培养研究，20种获得再生植株，如猕猴桃、核桃、枣等。多存在混倍现象。;单倍体后代特征;;胚乳培养过程;;;;胚乳外植体制备:种子消毒---取出胚乳

一般培养取材的最佳时期选择处于生长旺盛阶段的胚乳；

对于有较大胚乳组织的种子??可将种子直接进行表面消毒，在无菌条件下除去种皮；

对于胚乳被一些黏性物质层包裹的种子，需要去掉黏性物质。

;;

大多数植物的胚乳培养，无论是成熟或未成熟的，都需要首先经历愈伤组织阶段，才能分化出植株。

;;;胚乳培养的应用：;一、胚珠培养:

概念：在人工控制的条件下，对胚珠进行离体培养使其生长发育形成幼苗的技术。

;;;由于幼胚分离难度大，而胚珠分离则相对容易，在幼胚培养时常采用胚珠培养。

分为两种类型：受精胚珠培养 未受精胚珠培养;（一）胚珠培养的意义:

防止杂种胚早期败育，获得杂种植株；

受精前胚珠培养，可作为试管受精的基础；

未受精胚珠培养，能培养获得单倍体植株，用于单倍体育种。;（二）胚珠培养方法:

1、材料的选择和灭菌：

未授粉胚珠：开花前1-6天，

授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚时期有利于胚的发育。

灭菌：先对子房或外表组织消毒灭菌后，后取出胚珠培养。

;

2、培养基的影响：

植物激素：细胞分裂素对授粉胚珠发育常有促进作用。

有机物：添加有机附加物可以促进授粉胚珠的发育。

蔗糖浓度：3-12%，通常5%，高浓度利于孤雌生殖。; 3、胎座和子房对胚珠培养的影响：带有胎座或子房组织的胚珠相对较易培养。

4、胚发育时期的影响：一般来说，合子或早期原胚期的胚珠较难剖取和培养，对培养基的成分要求也较严格。;;;子房培养的分类;子房培养的培养过程;1.培养基;2.材料的选择和培养;;3.子房培养物的倍性;影响离体子房和胚珠产生单倍体的主要因素;子房培养的意义:

获得杂种植株；

未授精子房培养为试管受精提供技术基础；

未受精子房培养能获得获得单倍体植株，用于单倍体育种。;在进行未授粉子房培养时应注意的问题：

1、材料的选择：发育时期（接近成熟胚囊易于成功）

2、培养基：基本培养基（MS、N6、B5等）、植物激素（配合使用）、蔗糖浓度（3-10%）

3、培养方式：直插优于平放。;一、概念:

指将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术。

;根据无菌花粉授于离体雌蕊的位置，可以把离体授粉分为三种方式：

1、离体柱头授粉

2、离体子房授粉

3、离体胚珠授粉;;三、离体授粉的意义:

1可以克服远缘杂交中的不