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AngⅡ及NE对过表达Gαq乳鼠心室肌细胞钙信号影响的机制探究

一、引言

1.1研究背景

心肌肥厚是心脏对各种病理性刺激的一种适应性反应，表现为心肌细胞体积增大、心肌纤维增粗以及心肌间质纤维化等。长期的心肌肥厚会导致心脏舒张和收缩功能障碍，最终发展为心力衰竭，严重威胁人类健康。据统计，全球范围内心力衰竭的患病率呈逐年上升趋势，而心肌肥厚是心力衰竭发生发展的重要危险因素之一。心肌肥厚还与心律失常、冠心病等心血管疾病的发生密切相关，进一步增加了心血管疾病的死亡率和致残率。因此，深入研究心肌肥厚的发生机制，对于寻找有效的防治措施具有重要的临床意义。

1.2Gαq通路与心肌肥厚

Gαq蛋白是G蛋白偶联受体（GPCR）信号通路中的重要成员，在心肌细胞肥大过程中发挥着关键作用。当GPCR与相应的激动剂结合后，会激活Gαq蛋白，进而激活磷脂酶C（PLC），导致细胞内三磷酸肌醇（IP3）和二酰甘油（DAG）水平升高。IP3可促使内质网释放钙离子，DAG则激活蛋白激酶C（PKC），两者共同作用于下游信号通路，诱导心肌细胞肥大相关基因的表达，最终导致心肌肥厚。相关研究表明，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、去甲肾上腺素（NE）等激动剂可通过激活Gαq通路，引起心肌细胞肥大和心肌肥厚。

1.3钙信号与心肌肥厚

钙信号是心肌细胞中重要的信号转导途径，在心肌肥厚的发生过程中起着关键作用。正常情况下，心肌细胞内的钙离子浓度保持在较低水平，当心肌细胞受到刺激时，细胞膜上的钙离子通道开放，细胞外钙离子内流，同时肌浆网释放储存的钙离子，导致细胞内钙离子浓度迅速升高。升高的钙离子作为第二信使，与钙调蛋白（CaM）结合，激活钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）等下游信号分子，进而调节心肌细胞的收缩、舒张、增殖和凋亡等生理功能。研究发现，在心肌肥厚过程中，钙信号通路发生异常改变，导致心肌细胞内钙离子浓度持续升高，激活一系列与心肌肥厚相关的信号通路，促进心肌细胞肥大和心肌间质纤维化。

1.4研究目的与意义

本研究旨在探讨AngⅡ及NE对过表达Gαq乳鼠心室肌细胞钙信号的影响，明确Gαq通路在心肌肥厚发生过程中对钙信号的调控机制。通过本研究，有望揭示心肌肥厚发生发展的新机制，为心血管疾病的防治提供新的理论依据和潜在的治疗靶点。同时，本研究结果也有助于深入理解钙信号在心肌细胞生理和病理过程中的作用，为进一步研究心肌细胞的功能和疾病机制提供参考。

二、实验材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验动物

选用出生1-3天的ICR（InstituteofCancerResearch）乳鼠，购自[供应商名称]。ICR乳鼠具有繁殖力强、生长快、适应性和抗病力强等特点，在生物医学研究中应用广泛，尤其适用于细胞分离和培养相关实验。乳鼠饲养于温度为(22±2)℃、相对湿度为(50±5)%的环境中，保持12小时光照、12小时黑暗的昼夜节律，自由摄食和饮水。

2.1.2主要试剂与仪器

实验所需的主要试剂包括：DMEM（DulbeccosModifiedEagleMedium）高糖培养基，购自[品牌名称]，规格为500mL/瓶，用于细胞培养提供营养物质；胎牛血清，[品牌名称]，500mL/瓶，补充细胞生长所需的多种生长因子和营养成分；胰蛋白酶（0.25%），[品牌名称]，100mL/瓶，用于消化组织，使细胞分散；胶原酶Ⅱ型，[品牌名称]，100mg/瓶，辅助消化心肌组织；5-溴脱氧尿苷（Brdu），[品牌名称]，1g/瓶，抑制非心肌细胞的增殖；血管紧张素Ⅱ（AngⅡ），[品牌名称]，1mg/瓶，用于刺激细胞；去甲肾上腺素（NE），[品牌名称]，1g/瓶，刺激细胞以观察对钙信号的影响；Fluo-3/AM荧光探针，[品牌名称]，5mg/瓶，用于检测细胞内钙离子浓度；Pluronic?F-127，[品牌名称]，10g/瓶，增强Fluo-3/AM的水溶性；无水DMSO（二甲基亚砜），[品牌名称]，500mL/瓶，用于溶解Fluo-3/AM等试剂。

主要仪器有：二氧化碳培养箱，[品牌型号]，提供细胞培养所需的稳定环境；超净工作台，[品牌型号]，保证实验操作的无菌环境；倒置显微镜，[品牌型号]，用于观察细胞形态和生长状态；高速离心机，[品牌型号]，离心分离细胞和培养液；酶标仪，[品牌型号]，用于检测荧光强度；共聚焦激光扫描显微镜，[品牌型号]，精确检测细胞内钙信号。

2.2实验方法

2.2.1携带小鼠野生型Gαq基因的重组腺病毒的构建

利用AdEasy腺病毒载体系统构建重组腺病