GFP+-大鼠胚胎脊髓源性神经干细胞移植：脊髓损伤修复新探.docxVIP

GFP+-大鼠胚胎脊髓源性神经干细胞移植：脊髓损伤修复新探

一、引言

1.1研究背景

脊髓损伤（SpinalCordInjury，SCI）是一种极为严重的中枢神经系统创伤，通常由交通事故、高处坠落、暴力袭击或运动损伤等因素引发。随着现代社会中各类创伤事件的频繁发生，脊髓损伤的发病率呈现出逐年上升的趋势。在发达国家，其发生率约为13.3-45.9人/百万人/年，而我国上海市1991年统计的脊髓损伤发生率为34.3人/百万人，北京市2002年的发病率更是达到了60人/百万人。

脊髓损伤往往会导致患者损伤节段以下肢体严重的功能障碍，如运动功能丧失、感觉减退或消失、括约肌功能障碍等，进而引发呼吸功能障碍、长期卧床并发症以及心理问题等一系列严重后果。这些不仅给患者本人带来了身体和心理上的双重折磨，还对其家庭和整个社会造成了沉重的经济负担。

当前，临床上针对脊髓损伤的治疗方法主要包括手术减压、药物治疗以及康复训练等。手术减压旨在解除脊髓的压迫，为神经功能恢复创造条件；药物治疗主要通过使用神经保护剂、抗炎药物等，减轻脊髓损伤后的继发性损伤；康复训练则通过物理治疗、作业治疗等手段，帮助患者尽可能地恢复肢体功能。然而，这些传统治疗方法存在明显的局限性，它们虽然在一定程度上能够缓解症状、减少继发性损伤并促进部分神经功能的恢复，但无法实现神经组织的完全修复，对于完全性脊髓损伤患者，尤其是损伤节段以下完全性损伤的患者，治疗效果通常不尽人意。

随着再生医学的飞速发展，干细胞治疗作为一种极具潜力的新兴治疗策略，为脊髓损伤的治疗带来了新的希望。神经干细胞（NeuralStemCells，NSCs）是一类存在于中枢神经系统内，具有自我更新能力和多向分化潜能的原始母细胞，能够分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。将神经干细胞移植到脊髓损伤部位，有望通过其分化为神经细胞，桥接损伤区域，重新建立传导通路；分泌多种神经营养因子，改善脊髓局部微环境，促进神经元轴突的再生；以及使脱髓鞘化的轴突再髓鞘化等机制，实现脊髓神经功能的修复和重建。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过将GFP+-大鼠胚胎脊髓源性神经干细胞移植到大鼠脊髓损伤模型中，深入探究其对脊髓损伤的治疗效果及作用机制。具体而言，本研究期望达成以下目标：首先，观察GFP+-大鼠胚胎脊髓源性神经干细胞在损伤脊髓内的存活、迁移和分化情况，明确其在体内的生物学行为；其次，评估神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后运动功能、感觉功能等神经功能恢复的影响，判断其治疗脊髓损伤的有效性；最后，探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的潜在分子机制，为进一步优化治疗方案提供理论依据。

本研究的成果对于深入理解神经干细胞移植治疗脊髓损伤的作用机制具有重要的理论意义，有望为临床治疗脊髓损伤提供新的治疗策略和方法，具有潜在的临床应用价值，从而为广大脊髓损伤患者带来福音，减轻社会和家庭的负担。

1.3国内外研究现状

国内外关于神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究已取得了一定的进展。众多研究表明，神经干细胞移植能够在一定程度上促进脊髓损伤后的神经功能恢复。在作用机制方面，研究发现神经干细胞可以分化为神经元和胶质细胞，桥接损伤区域，重新建立传导通路，形成功能性突触；还能分泌多种神经营养因子，改善脊髓局部微环境，启动再生相关基因的顺序表达，促进神经元轴突的再生；同时，可使脱髓鞘化的轴突再髓鞘化，恢复神经的正常传导。

在移植方式上，目前主要包括直接注射、静脉注射和脊髓内移植等，不同的移植方式各有优缺点，研究人员正在探索最适宜的移植途径和时机，以提高治疗效果。此外，为了进一步增强神经干细胞移植的疗效，研究人员尝试将神经干细胞与其他细胞（如嗅鞘细胞、许旺细胞）或生物材料联合应用，取得了一些积极的成果。

在GFP标记技术的应用方面，由于GFP具有无需外加底物和辅助因子，只需紫外光或蓝光激发即可发出绿色荧光，易于检测、灵敏度高、荧光性质稳定、对细胞无毒害、构建载体方便、可直接用于活细胞测定、不受假阳性干扰以及广谱性等优点，被广泛应用于神经干细胞的标记和示踪研究中。通过GFP标记，可以直观地观察神经干细胞在体内的存活、迁移和分化情况，为研究神经干细胞移植治疗脊髓损伤的机制提供了有力的工具。然而，目前GFP标记技术也存在一些不足之处，例如野生型GFP有两个激发峰影响了其特异性，且长波激发峰强度较小，不易观察；GFP合成及折叠产生荧光的过程较慢，蛋白质折叠受温度影响大，表达量较低，在某些细胞中不表达等。针对这些问题，研究人员运用定点突变、DNA-shuffling等技术对GFP进行了改进，获得了多种突变体，扩大了GFP的应用范围，但在实际应用中仍需要进一步优化